基于量子点的CA125免疫层析试纸条的制备方法

摘要

本发明涉及一种基于量子点的CA 125免疫层析试纸条的制备方法；将量子点与CA 125抗体偶联制备成荧光探针QDs@Ab1，QDs@Ab1、CA 125和包埋在试纸条的另一种CA 125抗体(Ab1’)通过抗体抗原之间的作用，形成一种类似夹心的结构，建立Log(T/C)与CA 125浓度的相对应关联公式，将待测样本检测获得的T线与C线数值通过计算出其CA 125的浓度，实现定性定量地检测乳腺癌的肿瘤标志物CA 125。抗原浓度与探针荧光强度正相关，可定性定量检测CA 125；整个检测过程，成本低廉且操作简便，适合高危人群的社区肿瘤筛选，建立一种肿瘤检测的新方法；适合于产业化生产。

主权项

基于量子点的CA 125免疫层析试纸条的制备方法；其特征是步骤如下：(1)将水溶性量子点与1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐加入到反应器，然后向反应器中加入Tris‑HCl缓冲液，在旋转混合架上活化量子点的羧基；(2)反应结束后，采用离心分离进行纯化，用Tris‑HCl缓冲液清洗以除去未反应的1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐，得到活化的水溶性量子点；(3)将活化的量子点、CA 125单克隆抗体按照摩尔比为1:40～80比例混合于Tris‑HCl缓冲液中，涡旋仪上旋转使其混匀，将混合溶液置于旋转混合架上，室温下反应2～3小时；(4)反应结束后，采用离心分离进行纯化，用Tris‑HCl缓冲液清洗除去游离的抗体和1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐，得到荧光探针QDs@Ab1，然后将产物分散在含有1～5％牛血清白蛋白的Tris‑HCl缓冲液中，4℃静置过夜；(5)将另一种CA 125抗体以及羊抗鼠IgG用Tris‑HCl缓冲液稀释到1～2mg/mL，用点样仪喷于硝酸纤维素膜上以形成T线和C线；(6)将样品垫和结合垫进行预处理；(7)用含1％的BSA、1％的PEG‑4000、0.1％的Tween‑20、1％的蔗糖的Tris‑HCl缓冲液作为稀释液，对封闭后的水溶性量子点‑CA 125单克隆抗体(QDs@Ab1)混合液进行稀释，稀释倍数为5倍，并将稀释后的溶液均匀滴加在预处理后的结合垫上，静置5min，并随后于37℃恒温干燥箱中至完全干燥，得到终处理的结合垫，封袋置于4℃保存备用；(8)将预处理的样品垫，终处理的结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫按顺序固定于单面塑胶板上，各个垫和膜之间相互重叠1～3mm，完成试纸条的组装。