海水中脱一氧乙酰甲喹、脱二氧乙酰甲喹及MQCA的测定方法

摘要

本发明公开一种通过测定海水中脱一氧乙酰甲喹、脱二氧乙酰甲喹及MQCA（3‑甲基喹噁啉‑2‑羧酸）从而间接体现生物体药物残留指标的测定方法，包括仪器与试剂的选择和调配、样品提取与净化、具体的色谱条件和质谱条件。与现有技术相比，本发明可通过测定海水中脱一氧乙酰甲喹、脱二氧乙酰甲喹及MQCA（3‑甲基喹噁啉‑2‑羧酸）的含量从而间接体现生物体药物残留指标，具有速度快、成本低、对养殖海产品无伤害的特点，进而对目前养殖行业滥用抗生素的情况提供快速准确的数据支持，有利于促进养殖行业的健康发展。

主权项

海水中脱一氧乙酰甲喹、脱二氧乙酰甲喹及MQCA的测定方法，其特征在于：a) 仪器与试剂：超高效液相色谱‑串联质谱仪(Quattro Premier XE, Waters, USA)，超纯水仪(Milli‑Q Gradient, Millipore, France)，高速离心机(TGL‑10C, 上海安亭科学仪器厂)，超声波清洗器(KQ‑600E, 昆山市超声仪器有限公司)，氮吹仪(N‑EVAP^TM112, Organomation Associates, USA)，全自动固相萃取仪(ASPEC XL4+，GILSON，France)；甲醇(色谱纯)，乙腈(色谱纯)，甲酸(优级纯)，盐酸（优级纯），乙酸乙酯（色谱纯），甲酸（优级纯），乙酸钠（优级纯），固相萃取小柱(MAX 60mg 3mL，Waters，USA )；乙酰甲喹代谢物：MQCA（德国 Dr.）纯度>98%，脱一氧乙酰甲喹和脱二氧乙酰甲喹均由武汉格林拜尔生物科技公司合成，纯度>90%；混合标准溶液：称取适量乙酰甲喹代谢物标准品，用乙腈溶解，配成100 mg/L 标准储备溶液；b) 前处理方法量取500mL海水样品，固相萃取小柱预先用3mL甲醇和3mL 水活化，加入海水样品，用3mL水溶液淋洗，6mL含2%甲酸的乙酸乙酯洗脱收集；40℃下氮气吹干，加入1mL含0.1%甲酸的乙腈‑水溶液（70:30, v/v）1mL定容，超高效液相色谱串联质谱法测定；其中脱一氧乙酰甲喹、脱二氧乙酰甲喹及MQCA（3‑甲基喹噁啉‑2‑羧酸）的定量限均为：10ng/L；c) 色谱条件：色谱柱：ACQUITYTM UPLC BEHC18 (1.7μm, 2.1mm i.d.×100mm)；色谱柱温度：40℃；流动相：乙腈(A)和含有0.5%甲酸水 (B)；流速：0.25mL/min；进样量：10μL；柱温：40℃；三种乙酰甲喹代谢物液相梯度洗脱程序如下：d) 质谱条件：配制浓度均为1 μg/mL三种乙酰甲喹代谢物自动调谐液，采用蠕动泵进样方式(10 μL/min)，自动调谐，优化的质谱条件如下所示：电离方式：正离子(ESI+)；电离电压：2.50 kV；锥孔电压：30 V；离子源温度：110℃；锥孔反吹气流速：50 L/h；脱溶剂气温度：350℃；脱溶剂气流速：700 L/h；氩气流速：0.11 mL/min；其他参数如下，*代表定量离子：。