结直肠癌检测引物探针及其试剂盒

摘要

本发明涉及一种结直肠癌检测引物探针及其试剂盒，试剂盒包括用于配制数字PCR反应液的数字PCR预混液、液滴稳定剂和miRNAs引物探针混合液，以及用于进行RNA逆转录的茎环逆转录引物混合液；miRNAs引物探针混合液中包括用于检测hsa‑mir‑21、hsa‑mir‑29a和hsa‑mir‑92和hsa‑mir‑191的上游引物和探针，以及用于检测hsa‑mir‑21、hsa‑mir‑29a、hsa‑mir‑92和hsa‑mir‑191的通用下游引物；茎环逆转录引物混合液中包括分别用于逆转录hsa‑mir‑21、hsa‑mir‑29a和hsa‑mir‑92和hsa‑mir‑191的茎环逆转录引物；hsa‑mir‑21、hsa‑mir‑29a和hsa‑mir‑92是标志物，hsa‑mir‑191是内参。本发明的结直肠癌检测试剂盒可以快速、便捷、准确地检测作为结直肠癌早期诊断标志物的miRNA的表达水平。

主权项

一种结直肠癌检测引物探针，其特征在于：包括用于逆转录hsa‑mir‑21的茎环逆转录引物a，用于逆转录hsa‑mir‑29a的茎环逆转录引物b，用于逆转录hsa‑mir‑92的茎环逆转录引物c，用于逆转录hsa‑mir‑191的茎环逆转录引物d，用于检测hsa‑mir‑21的上游引物a和探针a，用于检测hsa‑mir‑29a的上游引物b和探针b，用于检测hsa‑mir‑92的上游引物c和探针c，用于检测hsa‑mir‑191的上游引物d和探针d，以及用于检测hsa‑mir‑21、hsa‑mir‑29a、hsa‑mir‑92和hsa‑mir‑191的通用下游引物；所述hsa‑mir‑21、hsa‑mir‑29a和hsa‑mir‑92是标志物，所述hsa‑mir‑191是内参；所述上游引物a的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述探针a的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；所述上游引物b的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，所述探针b的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；所述上游引物c的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述探针c的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示；所述上游引物d的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，所述探针d的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示；所述通用下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；所述茎环逆转录引物a的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示，所述茎环逆转录引物b的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示，所述茎环逆转录引物c的核苷酸序列如SEQ ID No.12所示，所述茎环逆转录引物d的核苷酸序列如SEQ ID No.13所示；所述探针a和探针b的5’端设有一种荧光报告基团，所述探针c和探针d的5’端设有另一种荧光报告基团，所述探针a、探针b、探针c和探针d的3’端设有淬灭荧光基团；所述各上游引物在反应体系中的终浓度为0.1μM/L～1.5μM/L，所述通用下游引物在反应体系中的终浓度为2μM/L～4μM/L；所述探针a在反应体系中的终浓度为0.1μM/L～0.15μM/L，所述探针b在反应体系中的终浓度为0.16μM/L～0.5μM/L，所述探针c在反应体系中的终浓度为0.1μM/L～0.17μM/L，所述探针d在反应体系中的终浓度为0.18μM/L～0.5μM/L。