两种人galig重组蛋白的表达及抗血清的制备方法

摘要

本发明涉及一种两种人galig重组蛋白的表达及抗血清的制备方法，属于获得肽的基因工程方法技术领域。优化人Mitogalig和Cytogalig开放阅读框的密码子及其化学合成，制备重组pET‑28b‑mitogalig‑Homo和pET‑28b‑cytogalig‑Homo，并转化至大肠杆菌BL21，进行IPTG诱导表达；以该重组蛋白为抗原制备小鼠抗血清。人Mitogaligin和Cytogaligin重组蛋白及其抗血清的成功制备为相关肿瘤诊断试剂和抗肿瘤新药物的研发奠定了良好基础。

主权项

两种人galig重组蛋白的表达方法，其特征在于，具体步骤如下：（1）密码子优化：对大肠杆菌20个氨基酸所对应的密码子进行统计，然后对人mitogalig和cytogaligORF进行密码子优化，将优化的mitogalig和cytogaligORF进行化学合成并连接至pET‑28b的Nde I和Xho I克隆位点上，制备重组质粒pET‑28b‑mitogalig‑Homo和pET‑28b‑cytogalig‑Homo；（2）重组蛋白的诱导表达①将pET‑28b‑mitogalig质粒转化至大肠杆菌感受态细胞BL21中，将转化液在含卡那霉素Kanamycin的琼脂盘上划线后37℃培养12 h，获得大量单菌落；②在诱导重组蛋白前一天，挑取单菌落接种于1 mL LB培养液中，进行12h的前培养；③将前培养按1%的体积接种于20 mL LB培养液中，37℃震荡培养至OD600 介于0.7～1.0时，取菌液并向其中加入IPTG，然后继续37℃震荡培养后，离心并彻底去上清；④pET‑28b‑cytogalig‑Homo按照上述步骤①‑③相同的方法和步骤进行诱导表达。