基于超声分散、差速离心和光谱技术测定蛋白质溶解度的方法

摘要

本发明公开了基于超声分散、差速离心和光谱技术测定蛋白质溶解度的方法。该方法建立蛋白质浓度标准曲线；然后制备蛋白质分散样品：每个蛋白质样本分别置于体积为V溶剂中，得到相应质量添加浓度为的样品；再进行差速离心以及样品蛋白质浓度的光谱测定；最后进行蛋白质溶解度的计算：将蛋白质样品质量添加浓度按由小到大的顺序纵行排列，离心速度j按由小到大的顺序横向排列，求出每行的标准方差s_i，标准方差s_i随蛋白质样品质量添加浓度小到大呈一次指数增加趋势，计算出曲率最大点对应的浓度为蛋白质的溶解度。该方法测定蛋白质的溶解度，稳定、快速、准确。

主权项

基于超声分散、差速离心和光谱技术测定蛋白质溶解度的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)建立蛋白质浓度标准曲线：将蛋白质溶入溶剂体系中，采用光谱技术测量其浓度，建立蛋白质浓度的标准曲线y＝ax+b，其中y代表特征吸收峰值，x代表蛋白质浓度；a、b分别为标准曲线的斜率和截距，由标准曲线待定系数法确定；(2)蛋白质分散样品的制备：将蛋白质在所选溶剂体系进行超声辅助搅拌预分散，根据分散过程蛋白质在所述溶剂体系中的溶解情况，从小到大等质量间隔称取蛋白质样品7～10个，样品质量分别记为m₁、m₂、...m_i，其中i＝7～10，每个蛋白质样本分别置于体积为V溶剂中，得到相应质量添加浓度为的样品；将i个样品置于超声场中，在温度为10～60℃，搅拌速度为100～500r/min的条件下搅拌分散，形成均一的胶体分散体系；(3)差速离心：离心速度0～3000r/min之间等转速间隔取j个点，j＝6～10，将步骤(2)得到的各样品在选定的j个速度下离心，得到(7～10)×(6～10)个样品；(4)样品蛋白质浓度的光谱测定：分别取步骤(3)离心后得到的上清液，稀释到步骤(1)标准曲线的蛋白质浓度范围内，采用光谱技术测量其特征吸收峰值，代入步骤(1)中标准曲线方程，计算离心后分散体系中各样品对应的质量浓度(5)蛋白质溶解度的计算：将蛋白质样品质量添加浓度按由小到大的顺序纵行排列，离心速度j按由小到大的顺序横向排列，根据步骤(4)中在不同离心速度下离心后每个样品对应的质量浓度求出每行的标准方差s_i，s_i由式(1)计算：$s_i=\sqrt{\frac{\underset{j=1}{\overset{j}{\Sigma }}{(c_i^j-\overline{c_i^j})}^2}{j}}---\left(1\right)$式(1)中：标准方差s_i随蛋白质样品质量添加浓度由小到大呈一次指数增加趋势，采用修正指数方程拟合得方程(2)：$s_i=\mathrm{n\; exp}(c_i^{\mathrm{add}}/t)---\left(2\right)$式(2)中n、t为指数方程系数，由拟合方程待定系数法确定；根据指数方程特征，式(2)存在曲率最大点，曲率最大点为s_i变化速率最大处，表示该蛋白质胶体分散体系稳定性恶化最快点，曲率最大点对应的浓度由式(3)得出，为蛋白质的溶解度：$c=\left|t\right|\ln \left|\frac{t}{\sqrt{2}n}\right|---\left(3\right).$