一种医用超纯高活性鱼皮胶原的制备方法

摘要

本发明提供一种医用超纯高活性鱼皮胶原的制备方法，包括原料处理、胶原提取和提取物纯化等步骤。采用本发明的医用超纯高活性鱼皮胶原制备方法，可充分有效的去除制备过程中产生的部分降解或者断裂的所有不具备300KDa分子量及三螺旋结构的胶原，以及鱼皮中含量较高的Ⅲ型胶原蛋白、Ⅴ型胶原蛋白及其他非胶原成分均可有效去除，获得Ⅰ型胶原含量≥99%胶原蛋白。本方法改用AKTA蛋白纯化系统，搭配凝胶分子筛层析柱进行纯化，根据不同分子量物质出峰时间不同，准确收集Ⅰ型胶原蛋白所出峰流出液，即可得超纯高活性Ⅰ型胶原蛋白。本方法较现有方法，有效去除降解的或者断裂的所有不具备300KDa分子量及三螺旋结构的胶原，所得产品超纯单一，具有更加广泛的使用范围。

主权项

一种医用超纯高活性鱼皮胶原的制备方法，其特征在于，所述鱼皮胶原制备按照以下步骤进行：1）原料处理：将清洗干净并脱水后的罗非鱼皮绞碎成 0.5‑5cm ² 的小块后，加入料液比1:10‑25（w/w）的2‑15%正丁醇脱脂，0‑4℃搅拌8‑12小时后排除废液，并重复3‑4次，用去离子水清洗，将清洗后的鱼皮以料液比 1:10‑25（w/w）放入0.05‑ 0.2M的NaOH 溶液中搅拌32‑48小时，每间隔8‑12小时更换所述NaOH溶液一次，再用去离子水充分清洗经碱溶液处理后的鱼皮直至中性；2）胶原提取：将清洗后的鱼皮以料液比1:5‑20（w/w）的比例放入 0.05‑0.5M 的酸性溶液中，加入0.1%‑0.5% 的胃蛋白酶搅拌24‑60小时，酶解处理得酶解胶原液；3）提取物纯化：加入料液比1:50‑500（w/w）的醋酸钠和料液比1:50‑500（w/w）的氯化钠到酶解胶原液中，用酸或碱液调pH 3‑9，用过滤设备过0.22微米滤膜，用AKTA纯化系统进行纯化，同时使用凝胶分子筛柱，用样品接收器准确接收Ⅰ型胶原所出峰流出液，流出液加入无水乙醇溶液，直至所述胶原液中的乙醇含量达到40‑75%，静置，过滤，得胶原蛋白，无水乙醇脱水，低温真空干燥得胶原蛋白粉末。