一种内皮祖细胞氧化应激模型的构建方法

摘要

本发明涉及一种内皮祖细胞氧化应激模型的构建方法，将购买的人外周血单个核细胞接种在人纤连蛋白涂层(FN)的培养皿中培养，加入M199培养基，培养箱中培养。3天后洗去未贴壁细胞，添加培养液继续培养，以后每隔3天换培养液。用胰酶消化细胞制成细胞悬液，取适量的内皮祖细胞悬液，加入等体积的氧化低密度脂蛋白，其终浓度为100μg/mL，培养箱中培养24h。将细胞再次用胰酶消化，离心后，细胞样用MTT法测定其生长抑制率，用流式细胞仪测定凋亡情况，并测定活性氧，GSH‑Px和线粒体膜电位等代表其氧化应激情况的参数。本发明提供了一种在细胞水平研究抗氧化物质及其机理的模型，且是首次用氧化低密度脂蛋白作为诱导物建立内皮祖细胞氧化应激模型。

主权项

一种内皮祖细胞氧化应激模型建立的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)将购买的人外周血单个核细胞接种在人纤连蛋白涂层的多孔培养板中培养，每孔加入1mL M199培养液，于37℃，5％CO₂饱和湿度的培养箱中培养；(2)培养2—4d后洗去未贴壁细胞，添加M199培养液继续培养，以后每隔2—4d换M199培养液；(3)用胰酶消化经步骤(2)培养的细胞制成细胞悬液，取细胞悬液并加入与细胞悬液等体积的氧化低密度脂蛋白，得混合液，氧化低密度脂蛋白在混合液中的终浓度为50至200μg/mL；再于37℃5％CO₂饱和湿度的培养箱中培养20—30h；(4)用胰酶消化经步骤(3)培养的细胞，离心后用PBS洗涤，然后用MTT法测定细胞生长抑制率，用细胞样用流式细胞仪测定细胞凋亡情况，并测定代表细胞氧化应激情况的参数，构建成内皮祖细胞氧化应激模型。