一种浒苔蛋白酶的制备方法

摘要

本发明公开了一种浒苔蛋白酶的制备方法，该方法包括：选择原料、高压清洗、漏水剪切、添加蛋白酶抑制剂榨汁、加入抽提液和缓冲液放入捣碎机制备粗抽提液、固体硫酸铵离心、乙酸溶液透析脱盐、加入罗氏蛋白酶抑制剂冰浴冷却、加入氯丁橡胶cr322搅拌离心、用碳酸氢钠纯化、n‑乙酰‑l‑半胱氨酸溶液结晶、冷冻离心收集结晶、成品保存。有效保证浒苔蛋白酶活力和纯度。本发明的可广泛应用在洗涤工业、食品工业、纺织工业、皮革工业、纸浆工业、饲料、石油天然气钻井、临床医药、农业、林业、畜牧业等行业。并在的应用中具有减少耗能，减少化学品、快速环保的优良效果。

主权项

一种浒苔蛋白酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)选择浒苔，并清洗打捞的浒苔；(2)将打捞的浒苔剪切，然后加入蛋白酶抑制剂进行榨汁，得到浒苔汁液；所述蛋白酶抑制剂的加入量为浒苔汁液重量的1％‑3％；(3)将浒苔汁液放入捣碎机，给捣碎机加入抽提液和缓冲液，捣碎抽提后将悬浮液过滤，得到的滤液为浒苔蛋白酶的粗抽提液；所述抽提液制备方法：按照1L蒸馏水加入0.5‑2g的氯化钠，配置氯化钠溶液，在配置好的氯化钠溶液中加入0.1‑0.3g氯化钾；按照1L蒸馏水配置的所述抽提液用于加入100克的浒苔汁液中；所述缓冲液制备方法：按照1L蒸馏水加入0.3‑1.5g三羟甲基甲烷，配置三羟甲基甲烷溶液，按照1L蒸馏水配置的所述缓冲液用于加入100克的浒苔汁液中；(4)在0‑2℃，将固体硫酸铵加入所述的粗抽提液中，搅拌，至溶液饱和度35‑45％，离心后弃上清液，得到浒苔蛋白酶溶液；(5)将浒苔蛋白酶溶液装入透析袋中，将透析袋浸泡在0.5‑2mol/L乙酸溶液中进行脱盐处理；(6)给脱盐处理后的浒苔蛋白酶溶液中加入罗氏蛋白酶抑制剂，冰浴冷却，再加入氯丁橡胶，搅拌，离心，得沉淀，沉淀再用重量百分比浓度为45‑90％的NaHCO₃溶液洗脱，搅拌，离心后再次得到沉淀；所述蛋白酶抑制剂用量为：每100克的浒苔汁液中对应加入0.05‑0.1ml蛋白酶抑制剂；所述氯丁橡胶的用量为：每100克的浒苔汁液中对应加入20‑30mg氯丁橡胶；所述45‑90％的NaHCO₃溶液用量为：每100克的浒苔汁液中对应加入5‑10g NaHCO₃溶液；(7)将步骤(6)最终得到的沉淀溶解于N‑乙酰‑L‑半胱氨酸溶液中，在23‑25℃室温下放置60‑120min生成结晶，所得到的结晶为浒苔蛋白酶；所述N‑乙酰‑L‑半胱氨酸溶液按照100mL蒸馏水加入0.1‑0.3gN‑乙酰‑L‑半胱氨酸配置N‑乙酰‑L‑半胱氨酸溶液，按照100mL蒸馏水配置的所述N‑乙酰‑L‑半胱氨酸溶液用于加入100克的浒苔汁液中。