基于卟啉与DNA双螺旋的沟槽镶嵌作用的无标记DNA的ECL检测方法

摘要

本发明公开了一种基于卟啉与DNA双螺旋的沟槽镶嵌作用的无标记DNA的ECL检测方法，通过固定在电极上的cDNA与目标DNA缔合后，引入互补配位的引物引发杂交链式反应，延长游离的末端达到纳米级长的双螺旋，并鉴于卟啉可插入作为支架的双链DNA的沟槽，大量ZnPPIX分子作为高效的ECL信号源，原位地将卟啉‑dsDNA复合物转变为杂化的ECL纳米链，形成了一个显著的ECL信号放大，其ECL光强与tDNA浓度呈正比。本检测方法灵敏度高，检测下限可达亚飞摩尔水平，拓展了以卟啉为中心的生物分析应用的范围。

主权项

基于卟啉与DNA双螺旋的沟槽镶嵌作用的无标记DNA的ECL检测方法，其特征在于，具体步骤如下：步骤1，在经打磨、去除杂质的玻碳电极表面滴加纳米金溶液，室温干燥，清洗后氮气吹干；步骤2，将巯基化的cDNA溶液滴加在纳米金修饰的电极表面，水汽饱和条件下过夜，之后用PBS缓冲液洗去未结合的巯基化的cDNA，然后滴加6‑巯基‑1己醇封闭，防止非特异性吸附，PBS缓冲液冲洗未结合的6‑巯基‑1己醇，之后将待检测的tDNA滴加到电极表面，水汽饱和条件下孵育，PBS缓冲液冲洗后，滴加发卡探针H1和H2到电极表面，水汽饱和条件下孵育3～4h，PBS缓冲液冲洗，最后滴加锌卟啉溶液到电极表面，孵育；步骤3，以步骤2得到的电极为工作电极，Ag/AgCl为参比电极，铂电极为对电极，以0.1M四丁基高氯酸铵的二氯甲烷溶液为电解液，采用循环伏安法检测ECL信号，调节电位为‑2.2～0V，扫描速度为100mV S^‑1，根据tDNA浓度对数值与ECL信号变化值的线性关系式计算出tDNA的浓度，得出待测液中tDNA的含量。