一种诱导重楼未成熟合子胚产生体细胞胚的组织培养方法

摘要

本发明是一种诱导重楼未成熟合子胚产生体细胞胚的组织培养方法，步骤为：将带肉质种皮的重楼种子去掉附着的纤维组织后流水清洗后自来水浸泡后消毒、清洗；无菌条件下将已消毒的种子剥离掉肉质种皮纵切胚乳；将剥离的未成熟胚接种于培养基上持续暗培养；培养6个月后，将诱导成功的体细胞胚生长至纺锤形后剥离并置于新的诱导培养基上继续培养即可获得90％诱导成功率的重楼体细胞胚。本发明诱导的体细胞胚可以直接诱导生成具有根和芽的完整植株，较愈伤组织具有更好的可塑性；本发明获得的体细胞胚生长分化速度远高于营养器官诱导的愈伤组织，且具有更高的遗传稳定性，通过体细胞胚诱导生成的重楼植株重楼皂苷组分及含量与原植物相比差异不显著。

主权项

一种诱导重楼未成熟合子胚产生体细胞胚的组织培养方法，其特征在于，步骤包括：1)取样及消毒：每年的8‑9月，将带肉质种皮的重楼种子去掉附着的纤维组织后流水清洗后自来水浸泡24小时，在无菌条件下经0.1％浓度HgCl₂消毒5min后，无菌水清洗10次；2)未成熟合子胚剥离：无菌条件下将已消毒的种子剥离掉肉质种皮，体式解剖显微镜下用组培镊子固定住剥去种皮的胚乳，用手术刀片纵切胚乳；3)体细胞胚诱导：将剥离的未成熟胚接种于pH为5.8的培养基上，20±1℃下持续暗光培养；4)胚性组织培养体系建立：培养6个月后，诱导成功的体细胞胚生长至纺锤形后未成熟胚剥离并置于新的诱导培养基上继续培养使其获得90％诱导成功率的重楼体细胞胚。