一种狭叶红景天种苗的快速培育方法

摘要

本发明公开了一种狭叶红景天种苗的快速培育方法，该方法以狭叶红景天的子叶柄为外植体，通过对外植体的胚性细胞和胚状体的诱导培养，成功培育出狭叶红景天的优质种苗，为狭叶红景天优质种苗的大量快速培育提供了一条新途径。

主权项

一种狭叶红景天种苗的快速培育方法，其特征在于包括如下步骤：(1)外植体的获得a.选取已成熟的狭叶红景天种子，将其消毒处理后接入MS+酵母提取物50～100mg·L^‑1培养基中，在每天光照10～14小时、光照强度为700～1200 lx和每天在5～8℃和20～25℃各培养12小时的条件下进行种子的萌发生长培养；b.取已萌发的狭叶红景天种子，转接入MS+川荞一号种子50～100g·L^‑1培养基中，在培养温度为15～25℃、每天光照8～12小时、光照强度为1500～2000 lx的条件下培养20天后，选取直径在1mm以上、长度为0.5～1.5cm的子叶柄作为外植体；(2)胚性组织细胞的培养：将子叶柄外植体靠近胚轴端部分插入到培养基B₅+2,4‑D 1.0～3.0mg.L^‑1+NAA 0.1～0.5mg+酵母多糖80～200mg·L^‑1中，在培养温度为12～28℃、每天光照10～18小时、光照强度为1000～1500lx的条件下培养15～25天后，插入培养基中的子叶柄产生胚性组织细胞；(3)胚状体的产生：切取步骤(2)中产生的胚性组织细胞，以50～100g·L^‑1的接种量接入液体培养基1/2MS+TDZ1.0～3.0mg·L^‑1+NAA0.5～2.0mg·L^‑1+酵母提取物100～300mg·L^‑1中，在摇床转速为80～100r·min^‑1、培养温度18～25℃、每天光照8～16小时和光照强度为1000～2000lx的条件下培养15～20天后，再转入1/2MS+6BA1～3.0mg·L^‑1+NAA0.5～2mg·L^‑1+酵母多糖200～400mg·L^‑1固体培养基中进行培养，培养温度和光照条件与液体培养基中培养相同，培养25～35天后在胚性组织细胞表面产生胚状体；(4)种苗的获得：将步骤(3)中产生的胚状体切割后接入1/2MS培养基中，在培养温度为18～30℃、每天光照12～24小时和光照强度为1800～3000 lx的条件下培养30～45天，即获得生长健壮的狭叶红景天种苗；上述所有培养基的蔗糖20～40g·L^‑1、pH值为5.8～6.6、琼脂为5～6.5g·L^‑1。