一种荧光素酶报告基因系统检测转录因子表达活性的方法

摘要

本发明提供了一种荧光素酶报告基因系统检测转录因子表达活性的方法，利用荧光素酶自身持久稳定并且易于检测的特性，将包含靶基因启动子的荧光素酶报告基因载体与转录因子表达质粒共同转染至细胞，细胞培养后，将一定数量的细胞用细胞裂解缓冲液裂解，收集含有荧光素酶的裂解液，离心取上清液，然后在荧光素酶活性检测缓冲液内实时检测出荧光素酶表达强度数据，并同时测得荧光素酶浓度，校正后，即可计算得到所述转录因子的表达量，即所需要检测的转录因子的表达活性；该方法的整个操作过程更加简单易行，耗时更短，通量更高，且具有较高的可重复性与准确度、以及更低的操作成本，因此，具有广阔的应用前景，并且具有优异的市场潜力。

主权项

一种荧光素酶报告基因系统检测转录因子表达活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤（1）：根据待检测表达活性的转录因子的蛋白质组成，确定能与所述转录因子结合的靶基因启动子序列，将筛选到的靶基因启动子的特定片段插入荧光素酶报告基因载体，并且，插入后的所述靶基因启动子的特定片段位于荧光素酶Luc的表达序列的上游，从而制得包含靶基因启动子的荧光素酶报告基因载体；步骤（2）：进行目标细胞的培养与铺板，得到待转染细胞；步骤（3）：配制脂质体、所述包含靶基因启动子的荧光素酶报告基因载体和转录因子表达质粒的混合物，使用该混合物转染步骤（2）所制得的待转染细胞，获得被转染的细胞；步骤（4）：将细胞裂解缓冲液加至所述被转染的细胞，进行裂解，收集裂解液，接着，离心所收集的裂解液，取上清液，加入至荧光素酶活性检测缓冲液中进行荧光素酶表达强度检测，并计算出荧光素酶的表达量，从而检测出所述转录因子的表达活性。