一种采用微生物发酵法制备S‑(+)‑2,2‑二甲基环丙烷甲酰胺的方法

摘要

本发明公开了一种单水相系统由微生物发酵转化2,2‑二甲基环丙烷甲氰制备S‑(+)‑2,2‑二甲基环丙烷甲酰胺方法。包括如下步骤：菌种培养：将赤红球菌菌种接入种子培养基中培养；发酵培养：将得到的赤红球菌菌种接入发酵培养基中进行发酵培养；细胞分离：将发酵液连续过膜，分离出细胞；第底物转化：将原料2,2‑二甲基环丙烷甲氰逐滴加入到含有赤红球菌的水溶液中；成品分离。本发明通过采用微生物发酵工艺，既提高了S‑(+)‑2,2‑二甲基环丙烷甲酰胺的产率，又简化了S‑(+)‑2,2‑二甲基环丙烷甲酰胺的提取工艺，成本低、污染少、环保压力小；具有反应条件温和，转化率高，最终产品分离彻底，产品质量高以及废水处理方便的特点。

主权项

一种采用微生物发酵法制备S‑(+)‑2,2‑二甲基环丙烷甲酰胺的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）菌种繁殖将赤红球菌菌种接入种子培养基中培养，菌种繁殖的条件为：将浓度10⁹‑10¹⁰个/ml的赤红球菌菌种以0.1%‑0.2%的接种量接入装有种子培养基的培养罐中培养；（2）发酵培养待步骤（1）中的菌种培养基OD₆₀₀为20‑30，培养时间36‑44小时，pH5.5‑6.0时，以5%‑10%的接种量将其接入装有发酵培养基的发酵罐中培养，培养温度为25‑30℃；（3）细胞分离将步骤（2）得到的发酵液进行培养基分离，除去培养基，得到菌体；（4）转化原料将菌体用30‑50倍发酵液体积的纯水混匀后逐滴加入2,2‑二甲基环丙烷甲氰，控制反应温度25℃‑28℃，滴加中维持2,2‑二甲基环丙烷甲氰浓度小于10g/L，转化结束后检测2,2‑二甲基环丙烷甲氰浓度低于0.2g/L，反应结束，得到S‑(+)‑2,2‑二甲基环丙烷甲酰胺和菌体的混合液；（5）成品提取用至少2倍量的氯仿或丙酮对上述混合液依次进行萃取、过滤、脱色、蒸馏得到粗品，粗品用至少4倍量的二氯甲烷或氯仿溶解后依次进行萃取、脱色、过滤、蒸馏，然后加入至少2倍量己烷或者甲苯后进行蒸馏结晶得到精制品。