基于表面等离子体激元共振检测蛋白激酶的方法

摘要

基于表面等离子体激元共振检测蛋白激酶的方法，包括以下步骤：A：采用金膜作为感应层，先用无水乙醇浸泡，再超声清洗干净后，用H₂火焰在金片表面退火，B：将步骤A处理后的金膜在氨基酸序列如SEQ ID NO：1的多肽P1溶液中浸泡，再将上述金膜在氨基酸序列如SEQ ID NO：2的多肽P2溶液中浸泡；用N2吹干，制得的多肽P₁、P₂修饰的传感金膜密封存储在‑18℃下备用；C：将步骤C制得的P₁多肽、P₂多肽修饰的传感金膜置于SPR仪器上，在传感金膜上流动注射蛋白激酶，当蛋白激酶与金膜表面的多肽结合后，会产生一个新的共振角度，共振角的大小即为SPR响应信号。

主权项

基于表面等离子体激元共振检测蛋白激酶的方法，其特征在于包括以下步骤：A：采用金膜作为感应层，所述的金膜在使用之前先用无水乙醇浸泡10分钟，超声清洗5分钟，再用二次水冲洗干净，并用N₂吹干，清洗干净后，用H₂火焰在金片表面退火，先预热，在将金膜与H2火焰呈45度角均匀退火30秒，用以清洁表面，去除表面非特异性吸附的物质；B：将步骤A处理后的金膜在氨基酸序列如SEQ ID NO ：1的多肽P1溶液中浸泡12小时，多肽P1的氨基酸序列为CPPPPTTYADFIASGRTGRRNAIHD，然后将金膜用二次水冲洗干净、N2吹干，再将上述金膜在氨基酸序列如SEQ ID NO ：2的多肽P2溶液中浸泡2 小时封闭未反应的金表面，多肽P2的氨基酸序列为CPPPP，再依次用DMSO、二次水冲洗干净金膜表面后用N2吹干，制得的P₁多肽、P₂修饰的传感金膜密封存储在‑18℃下备用；C：将步骤C制得的多肽P₁、多肽P₂修饰的传感金膜置于SPR仪器上，当入射光从棱镜向金属薄膜传播时，入射角大于临界角的时候，则会全内反射，产生消逝波，消逝波会诱发金属表面产生等离子体，当消逝波和等离子体的波矢量相同时，二者发生共振，全反射条件破坏，入射光能量被金属表面电子吸收，光波能量变成金属表面电子的运动，导致反射光的能量急剧下降，因此反射光谱上出现共振峰，共振峰即反射强度最低值，此时对应的入射角即为共振角，因为金膜表面的结构或厚度的变化表现为共振角度的变化，当基线稳定后，对应一个共振角度，即SPR响应信号，在上述的传感金膜上流动注射蛋白激酶，当蛋白激酶与金膜表面的多肽结合后，会产生一个新的共振角度，共振角的大小即为SPR响应信号。