构建在海马体区域特异性敲除IKKα基因的小鼠模型的方法及打靶载体和试剂盒

摘要

本发明公开了构建在海马体区域特异性敲除IKKα基因的小鼠模型的方法及打靶载体和试剂盒。本发明利用Cre‑LoxP重组系统构建在特定小鼠组织中敲除IKKα基因，从而建立IKKα基因敲除的转基因小鼠，以便在动物的整体水平研究NF‑κB信号通路与疾病尤其是肿瘤的作用机制。同时，为便于确定和监测IKKα基因在海马体区域的特异性敲除是否会对小鼠行为学造成影响，在本发明中利用红色荧光素酶RFP720连接至转基因载体中。即，本发明通过基因打靶技术，基于iRFP720近红外荧光蛋白和Cre‑LoxP基因敲除系统降低小鼠海马体区域内源性IKKα基因的表达，进而通过动物成像系统监测转基因小鼠的活体成像。

主权项

一种构建在海马体区域特异性敲除IKKα基因的小鼠模型的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)构建打靶载体pBR322‑MCS‑2S‑Chuk‑KI，所述打靶载体pBR322‑MCS‑2S‑Chuk‑KI的序列如SEQ ID NO.1所示；(2)将iRFP720红色荧光蛋白基因连接至打靶载体，然后导入小鼠，构建携带有iRFP720基因的IKKα基因knock in杂合型小鼠；(3)将IKKα基因knock in杂合型转基因小鼠与CamKIIalpha‑cre T29‑1转基因小鼠分别与C57野生型小鼠扩大繁殖，然后将IKKα基因knock in杂合型转基因小鼠与CamKIIalpha‑cre T29‑1转基因小鼠交配获得杂合IKKα^F/+.Camk2α.Cre‑LoxP小鼠，再利用杂合型小鼠自交获得纯合型IKKα^F/F.Camk2α.Cre‑LoxP小鼠；通过小动物活体成像仪分别观察杂合型及纯合型Cre‑LoxP小鼠的红色荧光，选择可以检测到iRFP720红色荧光蛋白表达的小鼠，即为在海马体区域特异性敲除IKKα基因的小鼠模型。