一种猕猴桃细菌性溃疡病菌的检测方法

摘要

本发明公开了一种猕猴桃细菌性溃疡病菌的检测方法，包括：将细菌ITS通用引物对所有猕猴桃溃疡病菌菌株扩增测序；对其进行ITS序列进行多重同源性比较分析，设计猕猴桃溃疡病菌特异引物和探针；对猕猴桃溃疡病菌特异引物和探针进行可用性检测、特异性检测、以菌液为模板的灵敏度检测、以DNA为模板的灵敏度检测、以接种猕猴桃枝条为对象的荧光PCR检测和以田间发病样品为对象的荧光PCR检测；直至获得实时荧光PCR引物和实时荧光PCR探针。本实发明可以有效地防止检测过程中的污染和假阳性结果，得到实时荧光PCR引物和探针，建立猕猴桃溃疡病菌实时定量荧光PCR检测体系，实现猕猴桃溃疡病菌的快速、特异、灵敏、定量检测。

主权项

一种猕猴桃细菌性溃疡病菌的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、将细菌ITS通用引物对猕猴桃溃疡病菌标准菌株和其它猕猴桃溃疡病病原菌的16S~23SrDNA间的ITS区域进行PCR扩增并测序，并得到测序后的序列；步骤二、用生物学软件clastal X对测序后的序列及GenBank数据库中已登录的丁香假单胞杆菌属ITS序列进行多重同源性比较分析，并找出猕猴桃溃疡病菌稳定性点突变区；步骤三、根据猕猴桃溃疡病菌稳定性点突变区，应用引物和探针设计软件Prmier Express设计猕猴桃溃疡病菌特异引物和猕猴桃溃疡病菌特异探针；步骤四、对猕猴桃溃疡病菌特异引物和猕猴桃溃疡病菌特异探针进行可用性检测、特异性检测、以菌液为模板的灵敏度检测、以DNA为模板的灵敏度检测、以接种猕猴桃溃疡病菌的猕猴桃枝条为对象的荧光PCR检测和以田间发病样品为对象的荧光PCR检测；步骤五、重复步骤三和步骤四直至获得用于对猕猴桃细菌性溃疡病菌检测的实时荧光PCR引物和实时荧光PCR探针。