双表达小干扰RNA的复制缺损型乙型肝炎病毒载体、其制备方法及应用

摘要

本发明提供了一种双表达小干扰RNA的复制缺损型乙型肝炎病毒载体、其制备方法及应用，以表达野生型HBV的质粒pCH‑9/3093为载体进行基因修饰，构建HBV‑shRNA双表达载体：首先，通过点突变，在基因组各蛋白起始密码ATG后添加终止密码；其次，将C基因区的203‑407位和S基因区的1715‑1961位的序列删除；最后，再在两个基因区分别插入H1‑shRNA表达框和U6‑shRNA表达框，构建双表达小干扰RNA的复制缺损型乙型肝炎病毒载体；本发明构建的双表达小干扰RNA的复制缺损型乙型肝炎病毒载体pCH‑203H1shG‑1715U6shG，抑制hrGFP的表达；构建的双表达小干扰RNA的复制缺损型乙型肝炎病毒载体pCH‑203H1sh6‑1715U6sh8，抑制HBV的表达与复制。本发明适用于双表达小干扰RNA的复制缺损型乙型肝炎病毒载体及其制备。

主权项

一种双表达小干扰RNA的复制缺损型乙型肝炎病毒载体，其特征在于：以表达野生型HBV的质粒pCH‑9/3093为载体进行基因修饰，构建HBV‑shRNA双表达载体：首先，通过点突变，在基因组各蛋白起始密码ATG后添加终止密码；其次，将C基因区的203‑407位和S基因区的1715‑1961位的序列删除；最后，在C基因区的203‑407位之间插入H1‑shRNA表达框；在S基因区的1715‑1961位之间插入U6‑shRNA表达框，构建双表达小干扰RNA的复制缺损型乙型肝炎病毒载体，；其中，所述的H1‑shRNA表达框包括H1启动子、shRNA序列和终止信号T6；所述的U6‑shRNA表达框包括U6启动子、shRNA序列和终止信号T6；所述的H1启动子和U6启动子的长度分别为103和122bp。