人雌激素受体α亚型单克隆抗体杂交瘤细胞株、单克隆抗体、制备方法、应用

摘要

本发明涉及生物技术领域，具体公开人雌激素受体α亚型单克隆抗体杂交瘤细胞株、人雌激素受体α亚型单克隆抗体、制备方法、应用。本发明人雌激素受体α亚型杂交瘤细胞株经过人乳腺癌ERα阳性组织蜡块免疫组化验证筛选获得，分泌抗体能力强，分泌的抗体效价高、特异性强。本发明单克隆抗体，可通过免疫组化方法，应用于评价乳腺癌等病变组织中雌激素受体α亚型的表达情况，对于后续的临床检验分析提供指导。同时，本抗体可制备用于检测雌激素受体α亚型的免疫检测工具。本发明抗体可与人雌激素受体α亚型蛋白反应，与人雌激素受体β亚型及细胞内其它蛋白无交叉，显著提高了人雌激素受体α亚型免疫检测的特异性、准确性与可靠性。

主权项

人雌激素受体α亚型单克隆抗体杂交瘤细胞株，其特征在于，由以下方法制备获得：依次包括以下操作步骤：ERα重组蛋白表达质粒的构建、ERα重组蛋白的表达与纯化、ERα重组蛋白免疫的小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合、细胞筛选与克隆；其中细胞筛选与克隆的具体方法为：培养融合后的细胞，初步筛选出上清液中与ERα抗原呈现阳性反应的细胞，取初步筛选出的细胞的上清液，利用收集获得的ERα阳性组织蜡块，对初步筛选出的细胞的上清液进行免疫组化验证，筛选获得与ERα阳性组织蜡块的实际临床检测结果相符的细胞株，然后对该细胞株按照有限稀释法进行亚克隆，即得所述的人雌激素受体α亚型单克隆抗体杂交瘤细胞株。