一种用细胞组织学技术判定油棕幼嫩花序性别的方法

摘要

本发明属植物生物学领域，涉及一种用细胞组织学技术判定油棕幼嫩花序性别的方法，是选取处于雌雄未显性期Ⅲ期的花序，经固定、脱水与透明、浸蜡与包埋、切片与烤片、脱蜡与染色后制作成切片，用显微镜对切片进行观察并拍照，计算花苞片原基数、花苞片数以及新的花苞片原基数、花原基分生组织数量，然后依据油棕幼嫩花序性别的判定规则判断花序的性别。本发明根据油棕的雌、雄花序在形态学和细胞组织学水平的差异，利用细胞组织学技术提早在雌雄未显性期判定花序性别，有效地缩短研究时间，加快研究进程，为进一步研究油棕花序性别分化机制与外界因子的关系提供基础，这对于在油棕生产中实现花期和性别比例调控、提高产量等具有重要意义。

主权项

一种用细胞组织学技术判定油棕幼嫩花序性别的方法，其特征在于，其具体步骤如下：1)、取材在油棕树上选取处于雌雄未显性期Ⅲ期的花序，先去掉先出叶和花梗苞片，然后再投入到FAA固定液中；2)、脱水与透明将固定好的花序样品依次在30％、50％、70％、100％的乙醇中放置2～3h；然后用正丁醇作为透明剂，在其中放置40～50h，每8h换一次透明剂；3)、浸蜡与包埋55～65℃下，在体积比为1:1的正丁醇和石蜡的混合液中放置10～15h，然后在纯蜡中再浸蜡10～15h，在这期间每4h换一次纯蜡；然后用KEDEE KD‑M生物组织包埋机对雌雄未显性期Ⅲ期的幼嫩花序的小穗轴进行包埋；4)、切片与烤片将包埋好的样品进行修块，然后用Leica RM2235旋转切片机进行纵向切片，厚度为5～10μm；在KD‑H烘片机上，40～50℃进行烤片，时间为6～10h；5)、脱蜡与染色(1)把蜡带切片用松节油浸泡20min；(2)更换新的松节油，浸泡蜡带切片20min；(3)用体积比为1:1的松节油和纯酒精的混合液浸泡3min；(4)纯酒精浸泡3min；(5)95％酒精浸泡2min；(6)85％酒精浸泡2min；70％酒精浸泡2min；(7)50％酒精浸泡2min；(8)1％的高碘酸浸泡；(9)流水冲洗5～10min，然后用蒸馏水浸洗；(10)Schiff试剂避光染色10～30min；(11)0.5％的偏重亚硫酸钠浸洗两次，每次1～2min已达到分色目的；(12)流水冲洗5～10min，蒸馏水浸洗10～20min；(13)50～60℃情况下，1％的苯胺蓝黑染色10min；(14)7％醋酸快速浸泡一下去除多余染料，空气中干燥，然后用蒸馏水洗涤；(15)纯酒精浸洗3min；(16)更换新的纯酒精，浸洗3min；(17)更换新的纯酒精，浸洗3min；(18)用体积比为1:1的纯酒精和松节油混合液浸泡3min；(19)松节油浸泡5min；(20)更换新的松节油，浸泡5min；(21)用中性树胶进行封片。最后利用装有LEICA DFC500镜头的LEICA DMLB显微镜对切片进行观察并拍照，计算花苞片原基数、花苞片数以及新的花苞片原基数、花原基分生组织数量；6)、油棕幼嫩花序性别的判定油棕幼嫩花序性别的判定规则：若A>50，或B>50，或C>50，则该花序为雄花序；若A<30，或B<30，或C<30，则该花序为雌花序；A：每个小穗轴上的花苞片原基数；B：每个小穗轴上的花苞片数以及新的花苞片原基数；C：每个小穗轴上的花原基分生组织数。