一种实时荧光定量PCR检测方法及其标准品和检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种实时荧光定量PCR检测方法及其标准品和检测试剂盒。利用特殊标准品制作标准曲线对待测样本HER2基因及参照基因进行实时荧光定量PCR检测，用于指导乳腺癌、胃癌的临床靶向治疗；提供了一种包含等比例参照基因与待测目的基因片段的质粒载体作为检测标准品；还提供了一种检测HER2基因扩增状态的实时荧光定量PCR试剂盒，包括HER2基因扩增状态检测的PCR反应体系、标准品及阴阳性对照品。本发明所提供的检测方法和检测试剂盒具有使用方便、检测效率高、节约成本等优势。本发明对于HER2阳性的乳腺癌的诊断，抗该疾病药物的研究开发、质量控制乃至临床应用都具有重要的意义。

主权项

一种基因拷贝数相对定量的实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。