一种防治病害的薯类专用微生物菌肥及其制备方法

摘要

本发明公开了一种防治病害的薯类专用微生物菌肥及其制备方法，具体是公开了一种防治甘薯黑斑病的专用微生物菌肥及其制备方法。该微生物菌肥的原料由抗霉菌素链霉菌菌粉，湿链霉菌菌粉，饲料类芽孢杆菌菌粉，加米里类芽孢杆菌菌粉，黄腐酸钾原粉混合而成；本发明的菌种能够利用微生物种间或种内的抗生、竞争、重寄生、溶菌作用，或者通过次级代谢产物诱导甘薯产生抗病性，能产生多种抗菌素如内霉素的复合物，非多烯抗真菌抗菌素，双氢链霉素，湿菌素和钴氨素类来抑制甘薯黑斑病病原菌，增强其防病效果；本发明微生物菌肥对人、畜安全，属于环境友好型，利用本发明的菌肥防治甘薯黑斑病不易产生抗药性，本发明制备方法简单、成本低、使用简单。

主权项

一种防治病害的薯类专用微生物菌肥，其特征在于，制备该微生物菌肥的原料按重量份为：抗霉菌素链霉菌菌粉20‑40份，湿链霉菌菌粉10‑30份，饲料类芽孢杆菌菌粉10‑30份，加米里类芽孢杆菌菌粉20‑40份，黄腐酸钾原粉20‑40份；其具体制备方法，包括以下步骤：步骤一、抗霉菌素链霉菌菌粉的制备取出抗霉菌素链霉菌菌种保藏管，用高氏一号固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天，在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6‑8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为抗霉菌素链霉菌种子液；发酵：将上述制备的抗霉菌素链霉菌种子液以1%‑3%的接种量接种至灭菌的抗霉菌素链霉菌固体发酵培养基上，菌种与抗霉菌素链霉菌固体培养基混合均匀后，将接好种的抗霉菌素链霉菌固体发酵培养基摊在发酵槽上，物料高度为3‑6cm，控温28‑32℃，第一天空气湿度保持为60%‑75%，过后空气湿度保持为40%‑50%，发酵3‑4天，检测其孢子含量不低于20亿CFU/g，即可低温风干至水分低于8%，粉碎过40目筛，即得到抗霉菌素链霉菌菌粉；其中，所述的高氏一号固体培养基：硝酸钾：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氢二钾：0.5，硫酸镁：0.5，氯化钠：0.5，硫酸亚铁：0.01克，琼脂：20克，蒸馏水补足1000ml ，PH7.2～7.4；其中，所述的抗霉菌素链霉菌固体发酵培养基：玉米酒糟80%，菜粕2%，玉米芯粉1%，石粉10%，麸皮7%，硫酸锰0.004%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.05%，固体培养基含水量为40%‑60%；各培养基灭菌的条件为：0.10‑0.15MPa，121℃灭菌30分钟；步骤二，湿链霉菌菌粉的制备取出湿链霉菌菌种保藏管，用PDA固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天，在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升PDA固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6‑8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为湿链霉菌种子液；发酵：将上述制备的湿链霉菌种子液以5%的接种量接种至灭菌的湿链霉菌固体发酵培养基上，菌种与湿链霉菌固体培养基混合均匀后，将接好种的湿链霉菌固体发酵培养基摊在发酵槽上，物料高度为5‑8cm，控温28‑32℃，前两天空气湿度保持为60%‑75%，过后空气湿度保持为40%‑50%，发酵4‑6天，检测其孢子含量不低于10亿CFU/g，即可低温风干水分低于8%，粉碎过40目筛，即得到湿链霉菌菌粉；其中，所述的PDA培养基：土豆200g，蔗糖20g，水1000mL，琼脂20g；其中，所述的湿链霉菌固体发酵培养基：稻壳粉80%，棉粕2%，玉米粉1%，石粉2%，麸皮15%，硫酸锰0.004%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.05%，固体培养基含水量为40%‑60%；各培养基灭菌的条件为：0.10‑0.15MPa，121℃灭菌30分钟；步骤三，加米里类芽孢杆菌菌粉的制备取出加米里类芽孢杆菌保藏管，用无氮固体培养基分别划平板进行复苏，30℃培养72小时，在平板下挑取单个菌落接种至装有无氮固体培养基的茄子瓶中，在30℃培养箱中培养72小时，用3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱，接种至装有300L加米里类芽孢杆菌种子培养基的500L发酵罐中，开搅拌120r/min，前8小时通气量为100L/min，8‑24小时后通气量为200L/min ，24小时后通气量为300L/min ，30℃培养32‑48小时，待总菌数含量不低于25亿cfu/ml，即可作为加米里类芽孢杆菌种子液；发酵：将上述制备的加米里类芽孢杆菌种子液以10%‑20%的比例接种至加米里类芽孢杆菌固体培养基上，混匀，在浅盘上发酵，堆料厚度为5‑10cm，控制发酵温度为30‑40℃，发酵36‑48小时，待芽孢含量不低于60亿cfu/g，即可晒干，待水分含量低于10%，粉碎过100目筛，即得到加米里类芽孢杆菌菌粉；其中，所述无氮固体培养基：蔗糖10g，磷酸氢二钾0.2g，硫酸镁0.2g，氯化钠0.2g，硫酸钙0.1g，碳酸钙5g，琼脂18g，蒸馏水1000mL，pH7.2；其中，所述加米里类芽孢杆菌种子培养基：糖蜜20g/L，木薯粉10 g/L， 菜粕粉40 g/L，硫酸镁0.4 g/L，硫酸锰0.6g/L，磷酸二氢钾0.6 g/L，碳酸钙10 g/L， pH7.0；其中，所述的加米里类芽孢杆菌固体培养基：玉米酒糟57%，麸皮35%，棉粕5%，石粉1%，粗玉米皮2%，磷酸氢二钾0.4%，硫酸镁0.05%，培养基含水量50%‑60%；各培养基灭菌的条件为：0.10‑0.15MPa，121℃灭菌30分钟；步骤四，饲料类芽孢杆菌菌粉的制备取出饲料类芽孢杆菌保藏管，用营养肉汁固体培养基分别划平板进行复苏，30℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种至装有营养肉汁固体培养基的茄子瓶中，在30℃培养箱中培养48小时，用3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱，接种至装有300L液体种子培养基的500L发酵罐中，开搅拌120r/min，前10小时通气量为200L/min，10小时后通气量为320L/min ，30℃培养16‑24小时，待总菌含量不低于30亿cfu/ml，即可作为饲料类芽孢杆菌种子液；发酵：将上述制备的饲料类芽孢杆菌种子液以总接种量的10%‑20%的接种量加至饲料类芽孢杆菌固体发酵培养基中，混匀，在浅盘上发酵，堆料厚度为5‑10cm，控制发酵温度为30‑40℃，发酵36‑48小时，待芽孢含量不低于80亿cfu/g，即可晒干，待水分含量低于10%，粉碎过100目筛，即得到饲料类芽孢杆菌菌粉；其中，所述营养肉汤固体培养基：蛋白胨10.0 g/L, 牛肉膏3.0 g/L，氯化钠5.0 g/L，琼脂20 g/L ，pH 7.2 ± 0.2；其中，所述液体种子培养基：玉米粉35 g/L， 豆粕粉20 g/L，鱼粉5 g/L，硫酸镁0.6g/L，硫酸锰0.5 g/L，磷酸二氢钾0.3 g/L，碳酸钙5.0 g/L，pH7.0；其中，饲料类芽孢杆菌固体发酵培养基：麸皮60%，DDGS（玉米酒糟） 32%，棉粕5%，石粉3%，尿素0.4%，磷酸氢二钾0.4%，硫酸镁0.05%，培养基含水量50%‑60%；各培养基灭菌的条件为：0.10‑0.15MPa，121℃灭菌30分钟；步骤五，将上面制成的各种菌粉按抗霉菌素链霉菌菌粉20‑40份，湿链霉菌菌粉10‑30份，饲料类芽孢杆菌菌粉10‑30份，加米里类芽孢杆菌菌粉20‑40份，黄腐酸钾原粉20‑40份；混合均匀，即为防治病害的薯类专用微生物菌肥。