一种有效制备果树高分子量DNA的方法

摘要

本发明涉及一种有效制备果树高分子量DNA的方法，其特征在于包括以下制备步骤：取苹果或桃或杏或樱桃或柿的鲜叶；核提取缓冲液：将10g鲜叶在液氮中研成细粉，加入200ml核提取缓冲液，置于冰浴中，用磁力搅拌器搅拌l0分钟。该匀浆经两层纱布过后，以3000转/分钟的速度，离心20分钟；本发明一种有效制备果树高分子量DNA的方法，步骤简单，容易操作，可以从绝大多数植物中制备（HMW）DNA，具有很好的推广作用。

主权项

一种有效制备果树高分子量DNA的方法，其特征在于包括以下制备步骤：（1）取苹果或桃或杏或樱桃或柿的鲜叶；核提取缓冲液；（2）将10g鲜叶在液氮中研成细粉，加入200ml核提取缓冲液，置于冰浴中，用磁力搅拌器搅拌l0分钟；该匀浆经两层纱布过后，以3000转/分钟的速度，离心20分钟；（3）弃上清，将沉淀物中加入少量核洗涤缓冲液，用毛刷轻轻打散，再加入约200ml核洗涤缓冲液混匀，以60转/分钟的速度，离心5分钟，弃沉淀；（4）将上清液于2000转/分钟的速度下离心20分钟；（5）将该沉淀洗涤l‑3次，用lml lHB（无β‑mercaptoet hanol ）将粗提核混匀，于45 C 下，与等量的l % LMP 琼脂糖混合均匀；（6）将步骤（5）产物装入凝胶块模具中，在4摄氏度温度下凝固l小时，将包埋有细胞核的凝胶块推入20倍体积的核裂解缓冲液中，50摄氏度下裂解24小时，其间更换裂解液两次；（7）将步骤（6）产物在4摄氏度下保存于0.5mol/L EDTA，lm mol／L PSMF 中；（8）将上述凝胶块置于大量的0.5xTBE中透析两小时，然后包埋于l % 琼脂糖凝胶的加样孔中，进行脉冲电泳，电泳结束后染色l0 分钟后获得的（HMW）DNA胶块。