一种检测非体液性稀有有核细胞的方法和试剂盒

摘要

本发明公开了一种对非体液性稀有有核细胞进行检测的新方法，对于多种手段得到生物体液中的非体液性稀有有核细胞，通过联合使用体液性细胞表面标志物的抗体以及非体液性稀有有核细胞的特异性探针，达到鉴别富集后的该稀有有核细胞的目的。相对于目前市场上已有的商品化鉴别方法而言，本方法将处理非体液性稀有有核细胞的荧光原位杂交（FISH）方法与处理体液性有核细胞的免疫荧光染色进行了良好的结合，针对同一张标本片进行系统的结合性处理，能同时并清晰地观察到这两种处理的结果。

主权项

一种对非体液性稀有有核细胞进行处理的方法，所述非体液性稀有有核细胞是从血源性表面标志物表达较强的体液中得到的，其特征在于，所述方法包括以下步骤：先对已富集的非体液性稀有有核细胞进行多聚甲醛重固定；再进行FISH处理：在37℃的2×SSC中浸泡5‑15min，后经75％、85％、无水乙醇逐级脱水，加入10ul探针，盖上盖玻片，变性5分钟，杂交20分钟‑4小时，然后用pH7.0±0.1的甲酰胺洗涤15min，或NP40洗涤1‑5min；随后进行免疫荧光处理：室温下，体液性表面标志物避光孵育标本40分钟‑1小时，轻轻洗掉标志物后，4,6‑二氨基－2－苯基吲哚复染封片；其中所述探针选自：CEP7、CEP8、CEP12；其中所述体液性表面标志物选自：CD3、CD31、CD34、CD45、CD50、CD69、CD84，CD102。