一种大肠杆菌@磁粒子磁靶向药物载体的制备方法

摘要

本发明涉及一种大肠杆菌@磁粒子磁靶向药物载体的制备方法，其主要是取预先培养和富集好的大肠杆菌悬浮液，通过高速离心回收细胞沉淀物；加入CaCl₂溶液，重悬大肠杆菌细胞沉淀，制成感受态细胞；再加入DNaseΙ酶溶液加热、振荡后进行高速离心回收细胞沉淀物，再加入蒸馏水高速反复离心5～10次，即得大肠杆菌空腔；将大肠杆菌空腔加入磁金属盐溶液中，制成感受态细胞，加热振荡后进行高速离心，回收细胞沉淀物；再加入NaBH₄溶液加热振荡，即得到大肠杆菌@磁粒子磁靶向药物载体。本发明来源广泛，廉价易得，工艺简单，容易大量制备，能够替代合成的高分子材料作为骨架材料。

主权项

一种大肠杆菌@磁粒子磁靶向药物载体的制备方法，其特征是：它包括如下步骤：(1)大肠杆菌空腔的制备在无菌条件下，取预先培养和富集好的浓度为5～10mg/mL大肠杆菌悬浮液，冰上放置10～20min；后置于高速离心机中，3000～4000r/min下离心10～15min，弃去上清液，回收细胞沉淀物；按每毫升CaCl₂溶液加入5～16mg细胞沉淀物的比例，加入0.1mol/L CaCl₂溶液，重悬大肠杆菌细胞沉淀，放于冰上10～30min，制成感受态细胞；再按CaCl₂溶液与DNaseΙ酶溶液体积比为2～5：1的比例，将配制好的0.2～0.5mg/mL DNaseΙ酶溶液加入上述CaCl₂溶液，放于冰上10～20min，然后放入42℃的环境中水浴加热1～5min，后置于空气浴振荡器中，保持在37℃，100～200r/min下振荡2～4h；然后置于高速离心机中，在3000～4000r/min下离心10～15min，弃去上清液，回收细胞沉淀物，按每毫升蒸馏水加入2.5～8mg细胞沉淀物的比例，在蒸馏水中加入细胞沉淀物重悬细胞沉淀，置于高速离心机中，3000～4000r/min的条件下，离心10～15min，反复离心5～10次，即得大肠杆菌空腔；(2)大肠杆菌@磁粒子的制备按每毫升磁金属盐溶液加入2～8mg大肠杆菌空腔的比例，将步骤(1)制得的大肠杆菌空腔加入0.01～0.1mol/L的磁金属盐溶液中，放于冰上10～20min；后放入35～42℃的环境中水浴加热1～5min，置于空气浴振荡器中，保持在37℃，100～200r/min下振荡3～4h；后置于高速离心机中，在3000～4000r/min下离心10～15min，弃去上清液，回收细胞沉淀物；然后按每毫升NaBH₄溶液加入2～8mg细胞沉淀物的比例，向0.03～0.3mol/L的NaBH₄溶液中加入细胞沉淀物，水浴50～70℃加热20～30min后置于空气浴振荡器中，保持在37℃，100～200r/min下振荡3～4h，即得到大肠杆菌@磁粒子磁靶向药物载体。