一种治疗骨性关节炎的制剂及治疗方法

摘要

本发明涉及一种治疗骨性关节炎的制剂，该制剂采用人羊膜间充质干细胞和0.01～2mg/mL分子量为20～2200KD的透明质酸溶液混匀，细胞密度为1×10⁶～1×10⁹个/mL，该制剂可治疗骨性关节炎和软骨损伤，也可在该制剂中加入药学上可接受的载体。治疗方法为采用局部注射hAMSCs细胞制剂0.01～1mL到骨性关节炎哺乳动物模型的关节腔内，每3～5周进行局部注射等量的hAMSCs细胞制剂，连续2～5次。该细胞制剂可显著抑制病灶炎症、促进糖胺聚糖和II型胶原蛋白的表达、修复受损软骨组织，疗效显著。

主权项

一种治疗骨性关节炎的制剂，其特征在于：所述制剂的制备方法为：将健康足月剖宫产新鲜胎盘钝性机械剥离羊膜，用含1%双抗的D‑Hank’s液反复冲洗羊膜，除去残留血渍和表面粘液后，将羊膜剪成1～3 cm²大小，分装于50 mL离心管内，加入约羊膜组织2倍体积的含0.02% EDTA‑2Na 的0.05% 胰蛋白酶消化液，于35～37℃恒温水浴箱中，150～185 rpm旋转消化约30 min，经300目不锈钢滤网过滤后，弃去含有羊膜上皮细胞的消化液，重新加入新鲜的含0.02% EDTA‑2Na 的0.05% 胰蛋白酶消化液，重复消化一次，再次经300目不锈钢滤网过滤后，弃去消化液；经上述胰蛋白酶消化后剩余的羊膜组织用含1% 双抗的D‑Hank’s液清洗一次，除去残留的胰蛋白酶消化液，加入含0.05 mg/mL DNase I的 0.5 mg/mL II型胶原酶消化液，于35～37℃恒温水浴箱中，150～185 rpm旋转消化1～2 h，直至剩余的羊膜组织碎片完全消化成絮状，经300目不锈钢网过滤，收集细胞滤液；1500rpm，4℃离心10 min，弃上清，细胞沉淀即为hAMSCs；用含10%胎牛血清的低糖DMEM重悬细胞，种于T25细胞培养瓶，在35～37℃，含1～10% CO₂及85～100%空气饱和湿度恒温培养，待细胞融合度达80%以上进行传代培养；将hAMSCs与0.01～2mg/mL透明质酸溶液混匀，细胞密度1×10⁶ ～1×10⁹个/mL，即得治疗骨性关节炎的细胞制剂。