副猪嗜血杆菌血清分型PCR方法

摘要

本发明通过比较副猪嗜血杆菌荚膜合成基因簇上的保守基因，并分析各血清型之间保守基因的差别，为15个血清型各设计多对引物，并从中各筛选一对作为血清分型PCR引物，并建立鉴别副猪嗜血杆菌15个血清分型PCR方法。本发明提供了一种准确度高、灵敏度高、特异性强的副猪嗜血杆菌血清分型PCR方法。

主权项

副猪嗜血杆菌血清分型PCR方法，该方法不用于疾病的诊断或治疗，包括以下步骤，1)引物设计：比对副猪嗜血杆菌的荚膜合成基因簇上的保守基因序列，为15种血清型分别对应设计一对引物，作为血清分型PCR引物；15对PCR引物的序列为SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.30；2)PCR扩增：以副猪嗜血杆菌15种血清型的参考菌株的基因组DNA为模板，以无菌双蒸水或超纯水为阴性对照，分别用上述设计的15对PCR引物进行PCR扩增；3)凝胶成像：PCR扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像系统观察每条引物扩增的目的条带，记录目的条带信息；4)菌株检测：以待测菌株的基因组DNA为模版，以无菌双蒸水或超纯水为阴性对照，分别用上述15对PCR引物扩增，电泳凝胶成像，与参考菌株的目的条带信息进行比对，进行血清分型鉴别。