一种黄芪注射液初生代谢成分的含量检测方法

摘要

本发明提供了一种黄芪注射液初生代谢成分的含量检测方法，基于定量核磁共振技术和解卷积(GSD)处理方法对黄芪注射液中的多种初生代谢成分同时进行含量测定，具体步骤为：(1)黄芪注射液样品溶液的制备；(2)¹H‑NMR指纹图谱的测定；(3)质子信号峰的定性鉴别；(4)¹H‑NMR多成分的含量测定；(5)¹H‑NMR谱的处理和解卷积参数设置；所述方法具有简便易行、稳定性好、精密度高、重现性好、专属性强等特点，在全面检测黄芪注射液质量方面具有广阔的应用前景。

主权项

一种黄芪注射液中初生代谢成分的含量检测方法，其特征在于：基于定量核磁共振技术和解卷积处理方法对黄芪注射液中的多种成分同时进行含量测定，具体步骤为：(1)黄芪注射液样品溶液的制备将黄芪注射液样品冻干后精密称取10mg，加入0.6ml含内标TSP0.2078mg/ml的D₂O，转移至5mm核磁管中，加封直接用于¹H‑NMR测试；(2)¹H‑NMR指纹图谱的测定将核磁管置于核磁共振仪中，采用水峰抑制脉冲序列测定黄芪注射液样品溶液的¹H‑NMR指纹图谱和对照品溶液的¹H‑NMR图谱，其中测试参数及条件为：抑水峰序列zgcppr，观测频率600.23MHz，测定温度298K，谱宽7211.5Hz，90°脉冲宽度13.8700μs，采样数据点65536，扫描次数16次，延迟时间15s，接受增益114；(3)质子信号峰的定性鉴别黄芪注射液溶液的¹H‑NMR图谱上质子信号峰分布在δ0‑5.5之间，其中δ0.0‑3.2是氨基酸和有机酸质子特征信号区，δ3.3‑5.5是糖基质子特征信号区，根据质子信号峰的化学位移值和偶合裂分情况，结合黄芪注射液的二维核磁图谱信息，共鉴定出20种初生代谢产物和4种次生代谢成分，所述20种初生代谢成分和4种次生代谢成分，分别为：(4)¹H‑NMR多成分的含量测定以3‑(三甲基甲硅烷基)丙酸‑d₄钠盐为内标化合物，应用以下公式测定黄芪注射液中8种初生代谢成分乙酸、脯氨酸、焦谷氨酸、丙二酸、甘氨酸、葡萄糖、蔗糖、甲酸的浓度：$P_X=\frac{A_X}{A_{TSP}}\frac{N_{TSP}}{N_X}\frac{M_X}{M_{TSP}}{P}_{TSP}$其中P_X和P_TSP分别为化合物和TSP的浓度，A_X和A_TSP分别是化合物定量峰和TSP甲基峰的积分面积，N_X和N_TSP分别代表化合物定量峰和TSP甲基峰的质子个数，M_X和M_TSP分别是化合物和TSP的分子量；(5)¹H‑NMR谱的处理和解卷积参数设置采用MetresNova软件对得到的¹H‑NMR指纹图谱依次进行相位调整、基线校正、定标和解卷积处理，解卷积参数设置中J‑Tolerance的设定值为0.4Hz，即可根据步骤(4)所述方法测定黄芪注射液8种初生代谢成分的含量。