一种肝微粒体中6α‑羟基紫杉醇浓度的UPLC/MS/MS检测方法

摘要

本发明公开了一种肝微粒体中6α‑羟基紫杉醇浓度的UPLC/MS/MS检测方法，包括以下步骤：(1)建立肝微粒体温孵体系，加入内标物系列浓度的6α‑羟基紫杉醇对照品，制备标准曲线样品；(2)将标准曲线样品注入UPLC/MS/MS液质联用仪进行检测；根据检测结果得到6α‑羟基紫杉醇的标准曲线；(3)按照步骤(1)相同的方法制备待测样品，将待测样品注入UPLC/MS/MS液质联用仪，按照步骤(2)相同的条件进行检测，根据标准曲线得到待测样品中的6α‑羟基紫杉醇浓度。本发明检测方法分析时间短、灵敏度高、进样量小，符合方法学验证要求，适用于肝微粒体温孵样本中6α‑羟基紫杉醇浓度的测定，具有广泛的应用前景。

主权项

一种肝微粒体中6α‑羟基紫杉醇浓度的UPLC/MS/MS检测方法，包括以下步骤：(1)建立肝微粒体温孵体系，加入内标物和系列浓度的6α‑羟基紫杉醇对照品，制备标准曲线样品；(2)将标准曲线样品注入UPLC/MS/MS液质联用仪进行检测；色谱条件如下：色谱柱：ACQUITY UPLC‑BEH C18色谱柱，规格为1.7μm,2.1×50mm；流动相：流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为0.1％甲酸乙腈溶液；流动相的流速为0.3mL/min；梯度洗脱条件为：运行时间为3分钟；质谱条件如下：毛细管电压为3000V，离子源温度为150℃，去溶剂化温度为350℃，去溶剂化气体流速为650L/h，锥孔气体流速为150L/h，雾化气压力为6.0bar；离子源：电喷雾离子源；检测方式：正离子多反应监测，监测的离子对为：6α‑羟基紫杉醇的母离子‑子离子对和内标物的母离子‑子离子对；根据检测结果得到6α‑羟基紫杉醇的标准曲线；(3)按照步骤(1)相同的方法，将底物紫杉醇与肝微粒体温孵体系共温孵，制备得到含有内标物的待测样品，将待测样品注入UPLC/MS/MS液质联用仪，按照步骤(2)相同的条件进行检测，根据标准曲线得到待测样品中的6α‑羟基紫杉醇浓度；所述内标物为邻甲苯海拉明；所述正离子多反应监测中，6α‑羟基紫杉醇的母离子‑子离子对为m/z 870.41→m/z286.05，锥孔电压为9V，碰撞电压为16V；邻甲苯海拉明的母离子‑子离子对为m/z 270.10→m/z 181.08，锥孔电压为15V，碰撞电压为12V。