一种采用假鳞茎诱导小沼兰植株再生及繁殖的方法

摘要

本发明属于濒危野生植物中重要植物材料快速繁殖方法，特别是涉及野生兰花的组织培养方法。该方法包括材料选取与消毒、诱导培养、增殖培养、诱导生根和移栽。本发明目的是提供一种采用假鳞茎诱导小沼兰植株再生及繁殖的方法。为促进珍稀兰花品种的研究、利用提供技术支持。本发明增殖系数高、生根率高，植物生长需求时间短，长势良好，整齐一致，大大缩短了苗木培养过程，节约了大量成本。为小沼兰的保护，以及规模化、产业化生产推广应用提供技术支持。

主权项

一种采用假鳞茎诱导小沼兰植株再生及繁殖的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：1）材料选取与消毒：将当天挖取的带叶假鳞茎植株用湿纱布包好，带回后置流水下冲洗干净，然后进行消毒处理，用于接种；2） 诱导培养：将消毒处理后材料，经滤纸吸干表面水分后平放接种于经高温、高压灭菌的鳞茎芽诱导培养基中；培养条件：培养室温度为23±2℃，光照时间5h/d，光照强度500～1000lx；叶片逐渐出现白色并逐渐死亡，假鳞茎逐渐变绿、长大；3） 增殖培养：将经上述诱导培养，所得到的生长良好的直径成长为0.1‑0.3 cm的假鳞茎，接种在增殖培养基中，光照时间5h/d，光照强度1000～1300lx；4） 诱导生根：将增殖培养出来的带有小叶片的假鳞茎无根幼苗单株，转移到生根培养基中；光照时间6h/d，光照强度1300～1500lx；5）移栽：当诱导生根培养试管苗生长至根1～3条，叶1片时，将试管苗放在自然光下炼苗5～7天，打开瓶盖炼苗1‑2天；然后取出培养苗，洗去附着在根系上的培养基，移入水草和腐殖土质量比为1:2的混合基质中，保湿遮阴，温度控制在15～25℃，湿度应保持在75％～85％，获得生长健壮的完整再生植株；所述鳞茎芽诱导培养基：VW+1.5mg/L 6‑BA+1.0mg/L KT+0.3mg/L NAA+1.5g/L蛋白胨 +25g/L Su+6.5g/L Ag+1.5g/L Ac+10g/L 香蕉+60 g/L土豆，pH值为5.6；所述增殖培养基：VW+2.0mg/L 6‑BA+1.0mg/L KT+0.5mg/L NAA+2g/L蛋白胨+1g/L VB₆+20g/L 香蕉+70g/L土豆+25g/L Su+6.5g/L Ag+1.5g/L Ac，pH值为5.6；所述生根培养基：1/2VW+1.0mg/L IBA+0.1mg/L NAA+1.5g/L VB₆+25g/L Su+6.5g/L Ag+1.5g/L Ac，pH值为5.6；其中，所述Ag为Agar培养基凝固剂和支持物琼脂粉的缩写；Su为Sugar提供植物碳源和维持渗透压蔗糖的缩写；Ac为活性炭。