一种抗人甲状旁腺激素的纳米抗体及其筛选方法和应用

摘要

本发明公开了一种抗人甲状旁腺激素(PTH)的纳米抗体及其制备方法和应用。本发明采用定点固载抗原后用于筛选抗体的方法，即在人甲状旁腺激素基因的碳末端加上一个半胱氨酸，进行原核表达纯化，并通过该半胱氨酸与马来酰亚胺的反应固定到ELISA板上，解决了传统筛选过程中亲水性抗原不易结合的问题，也解决了小分子抗原结构容易改变这一问题，更有利于筛选到针对正确结构的抗体，筛选出的抗体更具竞争力。本发明的纳米抗体对PTH具有很高的特异性亲和活性，其亲和常数在10⁹M^‑1以上，可应用于纯化蛋白、制备吸附剂材料、制备血液净化吸附材料、进行蛋白浓度检测等方面。

主权项

一种抗甲状旁腺激素的纳米抗体，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13或SEQ ID NO.14所示；其中：SEQ ID NO.1包括由SEQ ID NO.15～18组成的框架区、由SEQ ID NO.62～64组成的互补决定区和SEQ ID NO.59所示的铰链区；SEQ ID NO.2包括由SEQ ID NO.19～22组成的框架区、由SEQ ID NO.65～67组成的互补决定区和SEQ ID NO.59所示的铰链区；SEQ ID NO.3包括由SEQ ID NO.23～26组成的框架区、由SEQ ID NO.68～70组成的互补决定区和SEQ ID NO.59所示的铰链区；SEQ ID NO.4包括由SEQ ID NO.27～29和SEQ ID NO.18组成的框架区、由SEQ ID NO.71～73组成的互补决定区和SEQ ID NO.59所示的铰链区；SEQ ID NO.5包括由SEQ ID NO.30～32和SEQ ID NO.18组成的框架区、由SEQ ID NO.74～76组成的互补决定区和SEQ ID NO.59所示的铰链区；SEQ ID NO.6包括由SEQ ID NO.33～35和和SEQ ID NO.18组成的框架区、由SEQ ID NO.77～79组成的互补决定区和SEQ ID NO.59所示的铰链区；SEQ ID NO.7包括由SEQ ID NO.36～38和SEQ ID NO.18组成的框架区、由SEQ ID NO.80～82组成的互补决定区和SEQ ID NO.59所示的铰链区；SEQ ID NO.8包括由SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.39和SEQ ID NO.40组成的框架区、由SEQ ID NO.83～85组成的互补决定区和SEQ ID NO.59所示的铰链区；SEQ ID NO.9包括由SEQ ID NO.41、SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.29和SEQ ID NO.18组成的框架区、由SEQ ID NO.86～88组成的互补决定区和SEQ ID NO.59所示的铰链区；SEQ ID NO.10包括由SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.44和SEQ ID NO.45组成的框架区、由SEQ ID NO.89～91组成的互补决定区和SEQ ID NO.59所示的铰链区；SEQ ID NO.11包括由SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.47和SEQ ID NO.18组成的框架区、由SEQ ID NO.92～94组成的互补决定区和SEQ ID NO.59所示的铰链区；SEQ ID NO.12包括由SEQ ID NO.48～50和SEQ ID NO.18组成的框架区、由SEQ ID NO.95～97组成的互补决定区和SEQ ID NO.59所示的铰链区；SEQ ID NO.13包括由SEQ ID NO.51～54组成的框架区、由SEQ ID NO.98～100组成的互补决定区和SEQ ID NO.60所示的铰链区；SEQ ID NO.14包括由SEQ ID NO.55～58组成的框架区、由SEQ ID NO.101～103组成的互补决定区和SEQ ID NO.61所示的铰链区。