一种富含人参皂苷RH2的发酵物的制备方法

摘要

本发明涉及一种富含人参皂苷RH2的发酵物的制备方法，其特征在于包含以下步骤：A、在无菌条件下，将人参内生真菌黑色附球孢菌接种到PDA培养基上，装入发酵摇瓶中，摇瓶培养得扩培人参内生真菌黑色附球孢菌培养基；B、将红参粉末和蒸馏水投入发酵罐中，按每升料液3.0‑5.0g的量投入纤维素酶，酶解3‑6h；C、向反应釜内加入扩培人参内生真菌黑色附球孢菌培养基、MS液体培养基，供氧发酵36‑72h，得人参皂苷RH2发酵产物，干燥浓缩；D、将C步骤所得人参皂苷RH2发酵产物装入超临界萃取设备，进行萃取，将萃取产物在‑50℃下冷冻干燥48h，得富含人参皂苷RH2的发酵物。本发明制备的富含人参皂苷RH2的发酵物中人参皂苷RH2的产量远远高出一般红参中的含量。

主权项

一种富含人参皂苷RH2的发酵物的制备方法，其特征在于包含以下步骤：A、在无菌条件下，将人参内生真菌黑色附球孢菌接种到PDA培养基上，在20‑30℃条件下供氧培养24‑48h，氧浓度控制在0.020‑0.040mol/L；将培养好的菌种接种到含有PDA培养基成分的发酵摇瓶中，置于气浴恒温振荡器内，在20‑30℃，200r/min条件下供氧培养7‑10d，氧浓度0.020‑0.040mol/L；摇瓶培养得到菌种后，在相同条件下再次摇瓶培养，得扩培人参内生真菌黑色附球孢菌培养基，扩培人参内生真菌黑色附球孢菌培养基中人参内生真菌黑色附球孢菌菌浓度为1×10⁴‑1×10⁵ CFU/mL；B、将红参粉末和蒸馏水投入发酵罐中，投料比例为每15L蒸馏水中加入1kg红参粉末，将KH₂PO₄和Na₂HPO₄缓冲溶液加入发酵罐，调节发酵罐内料液pH=6.0‑7.0，按每升料液3.0‑5.0g的量投入纤维素酶，将料液加热至30‑40℃，保温、酶解3‑6h；酶解完成后，将料液加热至55‑65℃灭酶活，然后降至室温；C、无菌条件下，向反应釜内加入B步骤中初始投入红参粉末质量分数5.0‑10.0%的扩培人参内生真菌黑色附球孢菌培养基，加入B步骤中初始投入红参粉末质量分数20.0‑30.0%的MS液体培养基，所述MS液体培养基中含玉米淀粉5.0‑10.0g/L，葡萄糖15.0‑25.0g/L，胰蛋白胨5.0‑10.0g/L；再次加入KH₂PO₄和Na₂HPO₄缓冲溶液调节发酵罐内料液pH=6.0‑8.0，温度控制在30‑40℃，保温、供氧发酵36‑72h，氧浓度控制在0.025‑0.050mol/L，发酵完成降至室温，过滤去渣，得人参皂苷RH2发酵产物，干燥浓缩至水分含量低于0.5wt%；D、将C步骤所得人参皂苷RH2发酵产物装入超临界萃取设备，按人参皂苷RH2发酵产物重量比的5%，加入无水乙醇作为夹带剂，进行萃取，将萃取产物在‑50℃下冷冻干燥48h，得富含人参皂苷RH2的发酵物。