一种碳-13同位素标记的溴化膦化合物及制备方法和应用

摘要

本发明涉及一种结构式(I)的碳‑13同位素标记的溴化膦化合物及其制备方法和应用。本发明所述的碳‑13同位素标记的溴化膦化合物(C13‑TMPP‑Ac‑OSu)与C12‑TMPP‑Ac‑OSu配合使用，通过质谱分析在从头测序鉴定多肽的同时，利用含有两种不同标记物的同一多肽在质谱中出现的2个信号峰强度进行定量分析，从而实现多肽的从头测序与蛋白质定量分析的同步进行，其分析方法简单，稳定性好，精确度高。

主权项

一种对多肽从头测序及蛋白质定量分析的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)蛋白酶解；将100μg标准蛋白牛血清白蛋白BSA用含有5mM二硫苏糖醇的20mM碳酸氢钠缓冲液200μL溶解并孵育45分钟，再使用15mM的碘乙酰胺在常温黑暗中反应45分钟，加入2μg胰蛋白酶于37度反应12小时，最后加入0.1％三氟乙酸终止反应；2)TMPP正电荷衍生：取两份标准蛋白BSA酶解肽段产物分别加入C12‑TMPP‑Ac‑OSu试剂和C13‑TMPP‑Ac‑OSu试剂，再各加入碳酸氢钠缓冲液，反应15‑30分钟，加入三氟乙酸终止反应，反应产物分别命名为C12‑TMPP标记和C13‑TMPP标记；3)将C12‑TMPP标记与C13‑TMPP标记分别按照1:1比例混合；4)质谱分析：取1pmol混合后的正电荷衍生后肽段样品进行质谱分析，对含有两种不同标记物的同一多肽在质谱中出现的两个信号峰强度进行定量分析。