一种同时测定人血浆中OXC以及代谢产物MHD和MHD-G的检测方法

摘要

本发明涉及一种同时测定人血浆中OXC以及代谢产物MHD和MHD‑G的检测方法，属于生物检测技术领域。本实验以硝基安定为内标，蛋白沉淀法预处理后，采用高效液相色谱‑串联质谱法可同时检测3种化合物的血药浓度。本发明方法时间短、特异性强、灵敏度高、操作简便，已成功运用于人血浆中奥卡西平及其代谢产物的分析研究。

主权项

一种同时测定人血浆中OXC以及代谢产物MHD和MHD‑G的检测方法，其特征是步骤为：（1）血浆样品预处理：取血浆样品，加入内标硝基安定，再加入乙腈沉淀蛋白，离心取上清液，得到血浆样品；（2）色谱：将步骤（1）预处理后的血浆样品进行液相色谱分离：色谱条件中色谱柱：Phenomenex kinetex XB‑C18柱；流动相：乙腈:水体积比为50:50，水中含有质量浓度为0.1%的甲酸；流速：250~300μL/min；柱温：30~40℃；进样量：10μL；（3）质谱：离子源：电喷雾离子化ESI离子源，扫描方式：选择反应检测扫描SRM，喷雾电压：3500~4000V，鞘气：20~50psi，辅助气：10~20arb，毛细管温度：350℃，离子源温度：300℃；（4）计算：采用内标法，以OXC、MHD和MHD‑G和内标硝基安定的峰面积比值代入标准曲线方程，计算OXC、MHD和MHD‑G的血药浓度；步骤（1）具体为：取血浆样品150μL，加入1000ng/mL内标硝基安定溶液15μL，再加入乙腈285μL，涡旋混匀5~10min，13000rpm离心10~15min，离心后取上清液；步骤（1）所述血浆样品为含OXC、MHD和MHD‑G的血浆；步骤（2）中色谱柱长度为100mm，内径为2.1mm，填料粒径为2.6μm；步骤（3）中检测离子具体如下：OXC选择性反应检测离子[M+H]⁺ m/z 253.2→ m/z180.2 CE: 28eV；MHD选择性反应检测离子[M+H]⁺ m/z 255.2→ m/z194.2 CE: 21eV；MHD‑G选择性反应检测离子[M+H]⁺ m/z 431.1→ m/z194.2 CE: 28eV；内标硝基安定选择性反应检测离子[M+H]⁺ m/z 282.3 → m/z 236.2 CE: 22eV。