快速检测百合鳞茎腐烂病病原菌——尖孢镰刀菌的方法

摘要

本发明为一种基于DNA分子检测技术，应用于快速检测百合鳞茎腐烂病病原菌——尖孢镰刀菌的方法。它涉及一对用于扩增百合尖孢镰刀菌的特异性引物。本发明解决了以往需要从感病鳞茎分离、纯化病原菌，提取DNA后经通用引物扩增及测序比对后才能鉴定出病原菌的种类，即无法用现有的通用引物直接从扩增结果中鉴定出百合尖孢镰刀菌的问题。本发明用于扩增百合尖孢镰刀菌的特异性引物对命名为FO-lilii F/FO-lilii R，本发明的引物对能够快速准确地扩增出百合鳞茎腐烂病病原菌——尖孢镰刀菌的目的片段。

主权项

快速检测百合鳞茎腐烂病病原菌——尖孢镰刀菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)CTAB法提取真菌DNA。(2)设计百合尖孢镰刀菌的特异性引物对命名为FO‑lilii F/FO‑lilii R，正向引物FO‑lilii F的碱基序列为5′‑CTCCCAACCCCTGTGACATACC‑3′，反向引物FO‑lilii R的碱基序列为5′‑GCCGATCCCCAACACCAAAC‑3′。(3)用于检测百合尖孢镰刀菌的特异性引物对的PCR扩增体系为20μL：模版DNA 2μL，引物FO‑lilii F0.5μL，引物FO‑lilii R 0.5μL，2×Taq PCR Master Mix 10μL，ddH₂O 7μL。(4)用于检测百合尖孢镰刀菌的特异性引物对的PCR扩增反应程序为：(5)用于检测百合尖孢镰刀菌的特异性引物对的PCR扩增片段序列为：TAGTCCCGGCGACGCCCGCTCCGGTAAACGGGACGGCCCGCCAGAGGACCCCTAAACTCTGTTTCTATATGTAACTTCTGAGTAAAACCATAAATAAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCAAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTCAAGCACAGTTTGGTGTGGGGGGATCGGCA，长度为296bp。