一种快速制备大量鸡胚成纤维细胞的方法

摘要

本发明公开一种快速制备大量鸡胚成纤维细胞的方法，包括以下步骤：1)取鸡胚；2)胰酶冲洗；3)匀浆；4)消化；5)分散；6)传代培养，得到鸡胚成纤维细胞。本发明提供的方法得到的鸡胚成纤维细胞收获量相较于传统的方法，收获量提高20倍以上且操作时间短。经实践证明，每个鸡胚可以传10‑20个T225的细胞瓶。

主权项

一种快速制备大量鸡胚成纤维细胞的方法，包括以下步骤：1)取鸡胚：取9‑11日龄SPF鸡胚，消毒，无菌操作取出鸡胚；2)胰酶冲洗：将步骤1)取出的鸡胚剪成直径为0.5‑1cm块状组织；然后加入0.25wt％胰酶溶液冲洗，去除红细胞；3)匀浆：无菌条件下使用匀浆机将步骤2)处理后的鸡胚粉碎匀浆至鸡胚组织块直径小匀1mm；4)消化：向步骤3)匀浆后的组织块中加入0.25wt％胰酶溶液，轻晃混匀使进行消化；5)分散：吸取步骤4)消化后得到的上清液，转移至细胞瓶，吹打1‑3min，使细胞分散；6)培养：向步骤5)的细胞瓶内加入含有胎牛血清的培养基，在37℃、5％CO₂培养箱中培养，24‑32h后更换培养基，传代培养，得到鸡胚成纤维细胞。