一种基于AuNPs/Cu‑MOF标记的PCT电化学免疫传感器的制备方法及应用

摘要

本发明涉及一种快速、灵敏检测原降钙素抗原的电化学免疫传感器的制备领域，特别是涉及一种基于AuNPs/Cu‑MOF标记的PCT电化学免疫传感器的制备方法及应用。AuNFs比表面积大、导电性好、且具有好的生物相容性，作为基底材料，可以捕获大量的一抗，同时可以促进电子传递；AuNPs/Cu‑MOF标记二抗，可以提供灵敏的电化学信号，根据AuNPs/Cu‑MOF电化学信号强度变化与抗原的浓度关系，实现原降钙素抗原的快速、灵敏检测。

主权项

一种基于AuNPs/Cu‑MOF标记的PCT电化学免疫传感器的制备方法及应用，其特征在于，包括以下步骤：(1)用1.0 μm、0.3 μm、0.05 μm的Al₂O₃抛光粉依次打磨直径为4 mm的玻碳电极(GCE)，分别在乙醇和超纯水中超声清洗3 min，氮气吹干，取6~10 μL AuNFs分散液滴涂到电极表面，室温下晾干成膜，用PBS (pH 7.4) 缓冲溶液冲洗以除去未键合的AuNFs，得AuNFs/GCE；(2)取10 μL 6~10 μg/mL的原降钙素第一抗体(Ab₁)标准溶液滴涂到电极表面，4 ℃下孵化过夜，用PBS (pH 7.4)缓冲溶液冲洗，得Ab₁/AuNFs/GCE；(3)取10 μL 质量分数为1~3%的牛血清白蛋白(BSA)溶液滴涂到电极表面，在37℃下孵化1 h，封闭非特异性结合的位点，用PBS (pH 7.4)缓冲溶液冲洗电极表面，得BSA/ Ab₁/AuNFs/GCE；(4)滴加10 μL浓度为0.001~10 ng/mL的一系列不同浓度的原降钙素原抗原标准溶液用于与抗体特异性识别，在37 ℃下孵育60 min，用PBS(pH 7.4)缓冲溶液冲洗电极表面，得PCT/BSA/Ab₁/AuNFs/GCE；(5) 滴加6~10 μL AuNPs/Cu‑MOF标记的PCT第二抗体(Ab₂/AuNPs/Cu‑MOF)，37 °C下孵育60 min，用PBS(pH 7.4)缓冲溶液冲洗电极表面，制得一种基AuNPs/Cu‑MOF标记的PCT电化学免疫传感器(Ab₂‑AuNPs/Cu‑MOF/PCT/BSA/Ab₁/AuNFs/GCE)。