一种制造生物燃料的方法

摘要

本发明属于生物燃料领域，具体涉及一种制备生物燃料的方法，将副溶血性弧菌脱氢酶导入到已经转化有accABCD/ acr1/BTE/CER1基因并且fadE基因敲除的大肠杆菌中，表达即可获得相应的烷烃。本发明烷烃的生产效率得到大幅度的提高，而且制备简单，烷烃分泌在保外便于分离和纯化，能够适用于工业化的生产。

主权项

一种用于制备生物汽油的工程大肠杆菌，通过下述方法得到：通过聚合酶链式反应扩增乙酰‑C0A羧化酶基因、硫脂酶基因、脂酰‑CoA还原酶基因和脂肪醛脱羧酶基因，用胶回收试剂盒回收目的片段，然后分别双酶切目的片段和原核表达载体pET‑30a(+)或pACYCDuet‑1载体，载体片断胶回收后，将载体：基因片段按摩尔比为 1‑2 ： 4‑5的比例混合，加入T4DNA连接酶后4‑7℃连接15‑30小时，连接产物38‑42℃热击转化E. coli DH5a感受态细胞，涂布平板培养过夜，PCR筛选阳性克隆；阳性克隆提取质粒 DNA,酶切和测序鉴定后，热击转化E. coli BL21 (DE3)，最后敲除该工程大肠杆菌的fadE基因后即得目标工程大肠杆菌。