芒果精氨酸脱羧酶基因MiADC的克隆方法

摘要

本发明公开了一种芒果精氨酸脱羧酶基因MiADC的克隆方法，该方法以芒果为试验材料，通过芒果总RNA的抽提、cDNA第一链合成、保守区序列的克隆、3'和5'‑RACE的克隆及拼接、序列分析，获得芒果精氨酸脱羧酶基因MiADC的全长cDNA序列。通过本发明的方法获得的基因序列为芒果在非生物胁迫条件下进行分子育种提供基因资源，进一步为生态农业的发展提供理论支撑。

主权项

一种芒果精氨酸脱羧酶基因MiADC的克隆方法，其特征在于包括以下步骤：1)以芒果为供试材料，称取其叶片研磨后，提取其总RNA，并冷冻保存备用；2)以步骤1)的总RNA为模板，进行cDNA第一链的合成及3'和5'RACE ready cDNA的准备；3)以步骤2)中获得的cDNA为模板，进行MiADC基因保守区序列的扩增，并进行克隆测序；4)以步骤2)中获得的3'/5'RACE ready cDNA为模板，以步骤3)获得的保守区序列设计特异性引物扩增MiADC基因，并进行克隆测序。