一种重组犬干扰素α标准品、其制备方法及效价测定方法

摘要

本发明公开了一种重组犬干扰素α标准品、其制备方法及效价测定方法。将表达重组犬干扰素α的BL21/pET‑28α‑rCaIFNα重组菌进行发酵和诱导，后直接收集菌体破碎后上清提取总蛋白；然后采用三步纯化法后得到该制剂的纯品，向纯品中加入冻干保护剂进行真空冷冻干燥后得到标准品，其效价为1.0×10⁴IU/mL；SDS‑PAGE检测其纯度为97.34％；HPLC检测其纯度为99.79％；相对分子量为33KD。此方法制备的重组犬干扰素α作为标准品可用于重组犬干扰素α特性鉴别和效价测定的比对，以此为标准可使不同批次测定的重组犬干扰素α效价检测结果更为可靠可信。

主权项

一种重组犬干扰素α标准品的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：(1)将重组犬干扰素α的重组菌进行发酵和诱导，直接收集菌体破碎后上清提取总蛋白，所述重组犬干扰素α的重组菌为BL21/pET‑28α‑rCaIFNα工程菌；(2)总蛋白经亲和层析纯化、阴离子交换层析纯化、分子筛层析纯化，即可得到重组犬干扰素α纯化后蛋白溶液；(3)重组犬干扰素α纯化后蛋白溶液过滤除菌、稀释后加入冻干保护剂，经真空冷冻干燥，即可制得重组犬干扰素α标准品。