一种膝关节积液的游离DNA提取纯化的方法

摘要

本发明提供一种膝关节积液的游离DNA提取纯化的方法，主要特征在于两步离心法去除积液中的细胞和碎片等杂质，透明质酸酶、RNA酶、蛋白酶K联合作用，水解积液中的粘性物质和RNA杂质。通过本发明可以有效提取关节积液中的游离DNA，为研究游离DNA在关节炎相关疾病的致病机理的作用提供保障。

主权项

一种膝关节积液的游离DNA提取纯化的方法，其特征在于采取如下步骤：1)得到关节积液，离心，2至5℃，2800至3500转每分钟，10至20分钟；2)弃掉沉淀，上清液转移至新的离心管中，离心，2至5℃，10000至15000转每分钟，20至30分钟；3)弃掉沉淀，上清液0.22微米过滤至新的离心管中；4)室温平衡5至10分钟；5)加入透明质酸酶和RNA酶, 37℃孵育2至4小时；6)加入蛋白酶K，60℃孵育30至45分钟；7)加入1/5体积的CTAB缓冲液，65℃，孵育10至15分钟；8)加入等体积的氯仿，充分混合， 20至25℃离心，10000至15000转每分钟，10至20分钟；9)取水相层，转移至新的离心管中，使用试剂盒提取DNA，得到关节积液游离DNA。