用于皮肤护理和保养的胎盘亚全能干细胞培养液的制备

摘要

本发明公开了一种用于皮肤护理和保养的胎盘亚全能干细胞培养液的制备方法，通过对来源于人类的胎盘组织进行剪断破碎、降解、过筛、分离得到胎盘亚全能干细胞；然后将胎盘亚全能干细胞置于含有氨基酸、非必需氨基酸、细胞成长因子的干细胞培养液中进行培养；最后将收集到的上清液进行过滤处理并添加小分子胶原蛋白肽，就可得到胎盘亚全能干细胞培养液。本发明制备的胎盘亚全能干细胞培养液活性物质含量丰富、生物活性高，不仅可以护理和保养皮肤，而且可以促进皮肤的修复再生，加强皮肤的新陈代谢。

主权项

一种用于皮肤护理和保养的胎盘亚全能干细胞培养液的制备，其特征在于，具体包括如下步骤：(1)将采集的人类胎盘组织通过无菌方式进行剪断破碎为＜5mm³的小块胎盘组织；(2)在37℃的条件下用5mg/mL的胰蛋白酶对小块胎盘组织进行消化降解30min，降解期间温和震荡5次，降解结束后，通过细胞筛离心收集细胞悬液；(3)采用磁式细胞分选法对细胞悬液进行分离，首先使用CD184⁺磁珠进行阴性选择得到CD184^‑细胞，然后用CD151^‑磁珠分离得到CD151⁺CD184^‑细胞，最后用Oct4^‑磁珠分离出目的细胞，即胎盘亚全能干细胞；(4)将分离出的胎盘亚全能干细胞接种于装有干细胞培养液的无菌塑料培养瓶中进行原代培养，培养时间为3天，细胞正常长满瓶底后，原代培养结束；(5)用0.25％W/V的胰蛋白酶对原代培养的细胞进行酶解消化1min，然后加入干细胞培养液终止酶解并吹打细胞，得到原代培养酶解液；(6)原代培养酶解液与干细胞培养液以1∶3的体积比混合后置于无菌塑料培养瓶中进行传代培养，每代培养时间为3天，培养代次为四代；(7)将传代培养至第四代的无菌塑料培养瓶中的细胞上清液收集到无菌瓶中，并在设置有0.22μm的无菌混合纤维滤膜的过滤装置中进行过滤，得到过滤后的细胞上清液；(8)向过滤后的细胞上清液中添加3‑5mg/L，分子量为180‑3000道尔顿的小分子胶原蛋白肽，即得到胎盘亚全能干细胞培养液。