一种基于RNAi技术及rescue原理制备的siRNA和突变型克隆载体

摘要

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种利用RNAi技术和RNAi rescue原理制备的siRNA和突变型克隆载体。本发明的降低SPP1基因表达的小干扰RNA序列如SEQ ID NO：1‑2所示；本发明的突变型克隆载体针对前述降低SPP1基因表达的RNAi的靶序列构建。本发明的方法通过RNAi沉默基因观察功能变化情况，回复突变的载体与RNAi同时感染或转染目的细胞，沉默内源目的基因，通过外源突变型载体表达与内源相同功能的蛋白，经过这样组合处理细胞功能不发生改变；或者将突变型载体导入RNAi沉默后，功能得到回复，证明功能表型是由此基因引起的，为基因功能研究提供了一种新的模型和方法。

主权项

一种SPP1基因突变型克隆载体，含有SPP1蛋白表达序列，其特征在于，所述突变型克隆载体的SPP1蛋白表达序列中含有突变的RNA干扰靶序列，并能编码RNAi target mRNA区第三个碱基同义突变的SPP1基因mRNA；所述RNA干扰靶序列为一种降低SPP1基因表达的小干扰RNA所针对的RNA干扰靶序列；所述小干扰RNA包括正义链和反义链，所述正义链和反义链序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；所述RNAi target mRNA区为所述RNA干扰靶序列区段所对应并编码的mRNA；所述突变的RNA干扰靶序列如SEQ ID NO：4所示；所述RNA干扰靶序列如SEQ ID NO：3所示；所述SPP1蛋白表达序列如SEQ ID NO：23所示。