一种褐变率低的蝴蝶兰组培方法

摘要

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种褐变率低的蝴蝶兰组培方法，包括以下步骤：材料选取、材料制作、材料消毒、材料预处理、诱导培养、增殖培养、壮苗生根和移栽。通过采用本方法使组培过程中褐变率低，苗株成苗率高，苗株品质好，栽培后适应性强，通过生物技术手段在短时间内，满足了商业化生产的需求，为企业规模化、产业化培养蝴蝶兰提供了技术支持。

主权项

一种褐变率低的蝴蝶兰组培方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)材料选取：选取生长期为45d且无病虫害长势良好的蝴蝶兰花梗，采用花梗为外植体进行组织培养；(2)材料制作：将花梗切成带腋芽的3cm节段，节上平切，节下呈45°斜切；(3)材料消毒：用软刷毛将选取的蝴蝶兰花梗在水池中进行初步清洗，去除表面的泥沙，然后用洗洁精清洗干净，置于流水下冲洗60min，用蜡封蝴蝶兰花梗伤口，将蝴蝶兰花梗置于超净工作台上用经高温灭菌过的体积分数为75％的酒精消毒30s，再用无菌水冲洗5次，然后用质量分数为0.1％的氯化汞溶液加4～5滴吐温‑20消毒12min，消毒后用无菌水冲洗6～8次，用消毒滤纸吸干表面水分后放置于培养皿中备用；(4)材料预处理：将消毒后的蝴蝶兰花梗进行高温处理，温度为45℃，时间为10min，然后无菌条件下常温放置48h；(5)诱导培养：将预处理后的蝴蝶兰花梗，接种在诱导培养基中进行培养，先进行7d的暗培养，然后每天增加2小时的光照时间进行光培养，直到每天光照时间为12h/d为止，光照强度为1300～1500lx；前7～14d采用低温培养，培养温度为15～25℃，低温培养后，采用常温培养，培养温度为25～28℃；所述诱导培养基为：MS+0.4～0.8mg/L 6‑BA+0.05～0.08mg/L NAA+10～15g/L蔗糖+6～8g/L琼脂+10～15％椰汁+290～310mg/L柠檬酸+1～2g/L活性炭，pH值为5.4～5.5；(6)增殖培养：将诱导培养后的蝴蝶兰花梗转移至增殖培养基中，先进行7d的暗培养，然后每天增加2小时的光照时间进行光培养，直到每天光照时间为12h/d为止，光照强度为1300～1500lx；前7～14d采用低温培养，培养温度为15～25℃，低温培养后，采用常温培养，培养温度为25～28℃；所述增殖培养基为：MS+1～2mg/L 6‑BA+0.1～0.2mg/L NAA+10～15g/L蔗糖+6～8g/L琼脂+10～15％椰汁+290～310mg/L柠檬酸+1～2g/L活性炭，pH值为5.4～5.5；(7)壮苗生根：增殖培养后，选择高2cm以上、外植体上有明显突起的小苗转入生根培养基中，所述生根培养基为：MS+1.4～1.6mg/L 6‑BA+0.05～0.08mg/LNAA+10～15g/L蔗糖+6～8g/L琼脂+10～15％椰汁+8～12％香蕉汁+7～10％土豆泥，pH值为5.4～5.5；培养条件：培养温度25～28℃，光照时间为13h/d，光照强度为1300～1500lx；(8)移栽：当试管苗生长至4～5cm高，根2～4条，叶1～2片时，将试管苗放在自然光下炼苗5～7天，打开瓶盖炼苗1～2天；然后取出培养苗，用清水洗净附着在根部的培养基，清洗时注意不要损害根部，然后移栽至水苔和腐殖土质量比为1:2的混合基质中，保持湿度和通风，空气湿度为75～85％，温度为20～25℃。