一种制备静注人免疫球蛋白的方法

摘要

本发明提供了一种制备静注人免疫球蛋白的方法，它包括如下步骤：a、溶解：取Cohn法F Ⅱ沉淀，溶于注射用水中，澄清过滤，调节pH为6.60±0.1，搅匀，调节电导率为1.40±0.05ms/cm，调节温度为0～5℃，搅匀；b、层析：用DEAE Sepharose Fast Flow的层析柱纯化，收集人免疫球蛋白组份液；c、超滤：将步骤b的流穿液超滤并透析，至渗透压低于30mOsmol/kg时，浓缩，浓缩至蛋白浓度4.0％±1％(w/v)，得浓缩液；d、病毒灭活：在浓缩液中添加山梨醇至浓度为(33±1)％(w/v)，调整pH至5.00±0.1，在60℃±0.5℃下恒温10小时，冷却，澄清过滤；e、超滤，透析，配制，即可。本发明方法制备的静注人免疫球蛋白纯度高，Fc段生物学活性高，品质好，IgA等杂质因子含量低，副作用小，得率高，具有良好的市场应用前景。

主权项

一种制备静注人免疫球蛋白的方法，其特征在于：它包括如下步骤：a、溶解：取Cohn法FⅡ沉淀，溶于注射用水中，澄清过滤，调节pH为6.60±0.1，搅匀，调节电导率为1.40±0.05ms/cm，调节温度为0~5.0℃，搅匀；b、层析：用DEAE Sepharose Fast Flow的层析柱纯化，收集人免疫球蛋白组份液；c、超滤：将步骤b得到的人免疫球蛋白组份液超滤并透析，至渗透压低于30 mOsmol/kg时，浓缩，浓缩至蛋白浓度为4.0％±1％（w/v），得浓缩液；d、病毒灭活：在浓缩液中添加山梨醇至浓度为（33±1）％（w/v），调整pH至5.00±0.1，在60℃±0.5℃下恒温10小时，冷却，澄清过滤；e、超滤，透析，配制，即可；步骤a中，所述Cohn法FⅡ沉淀采用如下方法制备：（1）取Cohn法FⅠ+Ⅱ+Ⅲ沉淀，与0.01mol/L氯化钠溶液混匀，得离子强度为0.015、蛋白浓度为0.8～1.2％（w/v）的悬浊液；（2）第一次低温乙醇沉淀：取步骤（1）的悬浊液，调pH为5.00~5.20，添加乙醇至浓度为15%~18%（v/v），冷却至温度为‑4.0～‑6.0℃，测定pH，若pH不在5.00~5.20范围，补调至5.00~5.20，搅拌3h，静置3~5h，添加助滤剂，搅拌，压滤，收集FⅠ+Ⅲ上清；其中助滤剂的加入量为FⅠ+Ⅱ+Ⅲ沉淀的2%（w/w）；（3）第二次低温乙醇沉淀：取FⅠ+Ⅲ上清，调节离子强度至0.05，调pH为7.10～7.40，添加乙醇至浓度23～25％（v/v），调节温度为‑9.0℃~‑11.0℃，搅拌3小时，静置3~5小时，添加助滤剂，搅拌，压滤，得FⅡ沉淀；其中助滤剂的加入量为FⅠ+Ⅱ+Ⅲ沉淀的0.5%（w/w）。