定点突变LDLR基因的方法

摘要

本发明公开了定点突变LDLR基因的方法。本发明公开的定点突变LDLR基因的方法，包括向受体动物细胞中导入靶向LDLR基因靶序列的gRNA的编码基因与Cas9的编码基因，得到LDLR基因被定点突变的动物细胞；LDLR基因靶序列为序列表中序列3的核苷酸序列或序列表中序列4的核苷酸序列；靶向LDLR基因靶序列的gRNA的序列为将序列表中序列5或序列6中的T替换为U得到的序列。实验证明，本发明的靶向LDLR基因靶序列的gRNA能高效识别猪LDLR基因，在其作用下LDLR基因平均编辑效率可达50％，表明本发明的方法可以用来定点突变LDLR基因。

主权项

定点突变LDLR基因的方法，为采用CRISPR/Cas9方法进行定点突变，其特征在于：所述CRISPR/Cas9方法中使用的LDLR基因靶序列为靶序列1或靶序列2，所述靶序列1为如下B1)、B2)或B3)：B1)序列表中序列3的核苷酸序列；B2)与B1)限定的DNA序列具有75％或75％以上同一性的由B1)衍生的DNA序列；B3)在严格条件下与B1)限定的DNA序列杂交的由B1)衍生的DNA序列；所述靶序列2为如下C1)、C2)或C3)：C1)序列表中序列4的核苷酸序列；C2)与C1)限定的DNA序列具有75％或75％以上同一性的由C1)衍生的DNA序列；C3)在严格条件下与C1)限定的DNA序列杂交的由C1)衍生的DNA序列。