用于单细胞全基因组重亚硫酸氢盐测序的文库构建方法

摘要

本发明提供了一种单细胞全基因组重亚硫酸氢盐测序用文库的构建方法。具体地涉及一种改进的重亚硫酸氢盐测序用文库的构建方法。该建库方法包括：单细胞裂解；重亚硫酸氢盐处理；以重亚硫酸氢盐处理产物为模板的一链及二链合成；以及以二链合成产物为模板构建测序用文库。其中在重亚硫酸氢盐处理后的纯化步骤中，加入了tRNA，提高了处理产物的纯化及回收效率。采用本发明的文库构建方法，减少了样本的损失，提高了测序数据的比对率。

主权项

一种单细胞全基因组重亚硫酸氢盐测序用文库的构建方法，该方法包括：步骤A：将单细胞进行裂解，得到裂解后的单细胞样本；步骤B：将所述裂解后的单细胞样本进行重亚硫酸氢盐处理，加入tRNA进行纯化，得到纯化后的重亚硫酸氢盐处理产物；步骤C：以步骤B所述重亚硫酸氢盐处理产物为模板，使用含生物素标记的SEQ ID NO：1合成第一条链；步骤D：使用链霉亲和素磁珠调取所述步骤C合成的生物素标记的第一条链；步骤E：以步骤D所述调取的第一条链为模板，使用SEQ ID NO：2引物合成第二条链，获得合成第二条链的产物；以及步骤F：以所述合成第二条链的产物为模板进行PCR扩增，从而构建二代测序用DNA文库。