一种sevage试剂和乙醇联合提取水溶性热凝胶的方法

摘要

一种sevage试剂和乙醇联合提取水溶性热凝胶的方法，属于热凝胶提取技术领域。本发明通过产热凝胶菌株及产热凝胶内切酶菌株分别进行种子活化培养、发酵培养、再混合发酵培养达到发酵液的制备、上清液的提取、蛋白质的去除、水溶性热凝胶沉淀物的提取和提纯得到水溶性热凝胶。本发明将常用的sevage法去除蛋白和醇沉获取多糖的工艺有机结合，在没有改变目标产物（水溶性热凝胶）特性的前提下，高效地去除了发酵液中的蛋白质，获得了高纯度的水溶性热凝胶，为水溶性热凝胶的广泛应用提供技术支持。

主权项

一种sevage试剂和乙醇联合提取水溶性热凝胶的方法，其特征在于具体步骤如下：（1）发酵液的制备：a、将产热凝胶的高产热凝胶菌株划线接种于平板上，30℃培养2d，然后挑取单菌落接种于种子培养基A中，进行种子活化培养14‑18h；b、将产热凝胶内切酶的热凝胶内切酶菌株划线接种于平板上，30℃培养4d，然后挑取单菌落接种于种子培养基B中，进行种子活化培养16‑20h；c、将经过种子活化培养的高产热凝胶菌株及热凝胶内切酶菌株继续分别按照5%的接种量接种于各自的发酵培养基A及B中，均分别发酵培养16‑18h，发酵培养温度为25‑32℃，转速均为180‑220rpm；d、将步骤c所得发酵培养液A及B混合进行耦合发酵72‑168h，得到混合发酵液；以菌体干重计，培养液A︰培养液B体积比为1︰5‑15；发酵培养温度为25‑32℃，转速均为180‑220rpm；（2）上清液的提取：将步骤（1）得到的混合发酵液在6000‑10000*g、0‑4℃条件下离心10‑40min，得到上清液Ⅰ；（3）蛋白质的去除：利用sevage方法去除步骤（2）中所得上清液Ⅰ中的蛋白质，静置1h后得到上清液Ⅱ；（4）水溶性热凝胶沉淀物的提取：利用质量浓度为20%‑95%的乙醇提取步骤（3）所得上清液Ⅱ中的水溶性热凝胶，其中乙醇和上清液Ⅱ的体积比为2‑8︰1，处理时间为1‑7h；然后在6000‑10000*g、0‑4℃条件下离心10‑40min，得到水溶性热凝胶沉淀物；（5）提纯：取步骤（4）所得水溶性热凝胶沉淀物在0.4‑1.2MPa、40‑55℃条件下真空干燥1‑5h，得到产品高纯度的水溶性热凝胶。