一种MC3R基因敲除猪的制备方法

摘要

本发明公开了一种MC3R基因敲除猪的制备方法。本发明公开的MC3R基因敲除猪的制备方法采用CRISPR/Cas9系统进行，CRISPR/Cas9系统中包含gRNA1的编码基因和gRNA2的编码基因，gRNA1识别MC3R基因的靶序列为序列表中序列1；所述gRNA2识别MC3R基因的靶序列为序列表中序列2。实验证明，利用本发明的MC3R基因敲除猪的制备方法敲除MC3R基因的效率达到29.16％，并且本发明的方法能够快速高效的将目的基因大片段敲除，并且不留下外源基因片段，不仅可以用来研究MC3R基因的作用机制和机理，还可以用于动物育种。

主权项

敲除动物细胞中MC3R基因的方法，其特征在于：所述方法采用CRISPR/Cas9系统进行，所述CRISPR/Cas9系统中包含gRNA1的编码基因和/或gRNA2的编码基因，所述gRNA1识别MC3R基因的靶序列为靶序列1；所述gRNA2识别MC3R基因的靶序列为靶序列2；所述靶序列1为如下A1)、A2)或A3)：A1)序列表中序列1的核苷酸序列；A2)与A1)限定的DNA序列具有75％或75％以上同一性的由A1)衍生的DNA序列；A3)在严格条件下与A1)限定的DNA序列杂交的由A1)衍生的DNA序列；所述靶序列2为如下B1)、B2)或B3)：B1)序列表中序列2的核苷酸序列；B2)与B1)限定的DNA序列具有75％或75％以上同一性的由B1)衍生的DNA序列；B3)在严格条件下与B1)限定的DNA序列杂交的由B1)衍生的DNA序列。