| 发明名称 |
筛选超低岩藻糖细胞系的方法和应用 |
| 摘要 |
筛选超低岩藻糖细胞系的方法和应用,本发明提供了构建表达抗体和IgG‑Fc融合蛋白岩藻糖缺陷型的宿主细胞方法及抗体和IgG‑Fc融合蛋白岩藻糖活性的检测方法，及此类细胞株的具体应用。本发明通过TALEN(和/或CRISPR)技术高效敲除生产抗体或IgG‑Fc融合蛋白工程细胞中的岩藻糖基转移酶(FUT8)基因的表达来实现，通过小扁豆凝集素(LCA)加压、基因测序、流式细胞仪筛选方法，获得岩藻糖高效敲除的宿主细胞。并将岩藻糖缺陷的CHOK1宿主细胞株构建成表达抗体蛋白的稳定工程细胞株，获得抗体蛋白后进行糖型分析，结果表明岩藻糖敲除效率达99％以上。 |
| 申请公布号 |
CN106167525A |
申请公布日期 |
2016.11.30 |
| 申请号 |
CN201610194325.7 |
申请日期 |
2016.04.01 |
| 申请人 |
北京康明生物药业有限公司 |
发明人 |
朱晓东;张海涛 |
| 分类号 |
C07K16/00(2006.01)I;C07K16/46(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I;C12N5/10(2006.01)I;A61K39/395(2006.01)I |
主分类号 |
C07K16/00(2006.01)I |
| 代理机构 |
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代理人 |
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| 主权项 |
在哺乳动物宿主细胞中产生包含低抗体或IgG‑Fc融合蛋白岩藻糖含量抗体的方法，包括将至少一种编码靶向FUT8基因序列SEQ ID NO.1和FUT8基因Exon1区域的不同编码区的至少一种TALEN(和/或CRISPR/CAS9)的载体同时引入宿主细胞，抑制fut8的表达并降低抗体或IgG‑Fc融合蛋白的岩藻糖化水平，通过LCA方法分选获得岩藻糖缺陷型的稳定宿主细胞株。 |
| 地址 |
100176 北京市北京经济技术开发区科创六街88号孵化楼509室 |
