一种纯化细菌荚膜多糖的方法

摘要

本发明公开了一种纯化细菌荚膜多糖的方法，所述纯化方法利用非离子表面活性剂，通过相分离法纯化细菌荚膜多糖。细菌荚膜多糖疫苗的制备过程中需要尽可能多地去除杂质蛋白和内毒素，以减少疫苗的副反应。目前使用的苯酚抽提法、柱层析法以及乙醇沉淀法，均存在诸多的缺陷。与苯酚相比，非离子表面活性剂具有无腐蚀性无致癌性等特点，并且不会对环境造成危害。与柱层析相比，本发明的方法处理量大、省时、经济、容易扩大生产规模，是一种安全、环保、高效的细菌荚膜多糖的纯化方法。

主权项

一种纯化细菌荚膜多糖的方法，其特征在于，所述纯化方法包括以下步骤：（a）溶解多糖：用预冷的NaAC、NaCl混合溶解液，溶解含有细菌荚膜多糖的粗糖，得到混合液A；（b）抽提纯化：向步骤（a）中得到的混合液中，加入非离子表面活性剂，冰浴5~15min，然后置于室温下放置20~40min，再进行固液分离，收集上清液；（c）收集步骤（b）中得到的上清液，对于上清液，重复步骤（b）的处理3~5次，最终得到上清液即混合液B；（d）向混合液B中加入无水乙醇至乙醇终浓度为70~90%，混合均匀，4℃静置40~60min，再进行固液分离，以去除非离子表面活性剂，收集沉淀物A；（e）用CaCl₂溶液溶解步骤（d）所述的沉淀物A，超滤后，收集回流管中的回流液，向其中加入无水乙醇至乙醇终浓度为70~90%，4℃静置40~60min，再进行固液分离，收集沉淀物B；（f）用无水乙醇和丙酮清洗步骤（e）得到的沉淀物B，分别清洗1~3次，干燥后，即得到所述纯化后的细菌荚膜多糖。